THE UN-ENFECTIVITY OF THE
P F
CULTIVATED STRAIN
OF
T R Y P A N O S O M A C R U Z I
TO MICE. AN EVALUATION
THROUGH A ONE YEAR PERIOD BY BLOOD CULTURES
AND HISTOPATHOLOGY *
Humberto Menezes **
T r y p a n o s o m a c r u z i o f t h e c u l t i v a t e d P F s t r a i n w h e n i n j e c t e ã i n m i c e p e r
s u b c u t a n e o u s r o u t e , i n a â e q u a t e d o s e s , is a b l e t o i n d u c e an, e f f i c i e n t s t e r i l e
i m m u n i z a t i o n i n t h e a n i m a i s ( f o r a t l e a s t o n e y e a r ) a s d e t e r m i n e d b y w h o l e b lo o d c u l t u r e s a n d h i s t o p a t h o l o g y .
I N T R O D U C T I O N
I t is w e ll k n o w n t h a t e a c h a n t i g e n p r e - s e n t e d t o t h e l y m p h o id s y s t e m c a n r e a c t w i t h a p o p u l a t i o n o f i m m u n o c o m p e t e n t ce lls, v a r i a b l e w i t h t h e a n t i g e n u s e d (4 ).
T h e q u a n t i t y a n d t h e r o u t e u s e d f o r t h e a n t i g e n a r e a ls o o f i m p o r t a n c e , g iv in g p la c e to a n i m m u n e r e s p o n s e w h i c h m a y v a r y f r o m o p t i m a l t o n o r e s p o n s e a t a l i
( i m m u n o t o l e r a n t c o n d i t i o n ) .
I h a d d e m o n s t r a t e d (14) t h a t 3 x 102 liv e p a r a s i t e s o f t h e P F s t r a i n i n j e c t e d b y s u b c u t a n e o u s r o u t e , w i t h a b o u t 30 t r y p o - m a s t i g o te s , w e r e a b l e t o g iv e a n e f f i c i e n t p r o t e c t i o n to lOg b o d y w e ig h t m ic e , a g a i n s t a v i r u l e n t i n f e c t i o n o f T r y p a n o s o m a c r u z i t h a t k ille d 80% o f t h e c o n t r o l a n i m a i s .
T h i s w o r k a i m s t o d e m o n s t r a t e t h a t t h e r o u t e a n d t h e d o s e o f t h e liv e P F p a r a s i t e s a r e v e r y i m p o r t a n t i n o b t a i n i n g a s a f e i m m u n e r e s p o n s e , a s a p p l i c a b le t o a n y liv e v a c c in e .
M A T E R IA L A N D M E T H O D S
A lb in o m ic e f r o m o u r M e d ic a i S ch o o l A n im a l F a c i l i ti e s w e r e u s e d . 130 o f t h e m , a l i m a l e , w i t h a n i n i t i a l b o d y w e ig h t o f lOg w e r e d iv id e d i n g r o u p s o f 10.
80 o f t h e s e a n i m a i s r e c e iv e d b y s u b c u t a n e o u s r o u t e 6 x 103 p a r a s i t e s o f t h e P F s t r a i n r a i s e d i n W a r r e n m é d i u m (2 2 ), d i a - l y z a t e d i n a c c o r d a n c e w i t h t h e N a k a m u r a t e c h n i q u e (2 0 ).
T h e c u l t u r e m é d iu m w a s p u t i n t o c e llo - p h a n e b a g s i m m e r s e d i n 1.5 v o lu m e s o f R i n g e r - H a r t m a n n s o l u t io n (10) a d j u s t e d w i t h N a O H so l. t o p H 7.5.
T h e c u l t u r e u s e d a s v a c c in e w a s 8 d a y s o ld a n d t h e p e r c e n t a g e o f m o b ile f o r m s w a s a b o u t 80% w i t h 0.8% tr y p o m a s t i g o te s , a s d e t e r m i n e d i n 1,000 p a r a s i t e s c o u n te d a t r a n t í o m i n G ie m s a s t a i n e d s m e a r s .
T h e R i n g e r s o l u t io n w i t h f l a g e l la te s w a s c e n t r i f u g e d a t 1,500 r p m f o r 15 m i n u te s a n d t h e s e d i m e n t s u s p e n d e d i n s t e r i l e s o
-* P r e s e n t e d t o t h e X C o n g r e s s o B r a s i l e i r o d e P a t o l o g i a . C i i r i t i b a , 0 5 / 0 9 / 7 4 .
* * U S P . D e p a r t a m e n t o d e G e n é t i c a e M a t e m á t i c a A p l i c a d a à B i o l o g i a d a F a c u l d a d e d e M e d i c i n a d e R i b e i r ã o P r e t o , S á o P a u l o , 1 4 .1 0 0 , B r a s i l .
2 ,
—r
Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
Vol. IX — N? 1
lu tio n , p H 7.0 t o g iv e t h e a b o v e m e n t i o n e d c o n c e n t r a tio n .
T h e 50 o t h e r m ic e w e r e k e p t a s C o n tr o ls , u n d e r i d e n t i c a l c o n d itio n s .
30 d a y s , l a t e r , 10 o f t h e v a c c i n a t e d a n i m a i s a n d 10 C o n tro ls w e re i n f e c t e d , p e r i n t r a p e r i t o n e a l r o u t e , w i t h 5,000 p a r a s i t e s / g b o d y w e ig h t. T h e i n f e c t i n g p a r a s i t e s w e re b lo o d f o r m s o f t h e v i r u l e n t Y s t r a i n , m a i n t a n e d t h r o u g h s e r in g e p a s s a g e s in b a b y m ic e .
D e t e r m i n a t i o n s o f p a r a s i t e m i a b y t h e P iz z i - B r e n e r t e c h n i q u e (6) w e r e p e r f o r m e d 8, 15, 30 a n d 60 d a y s a f t e r t h e i n f e c t io n .
O n t h e s a m e d a y , 10 o f t h e m ic e w h i c h w e re v a c c i n a t e d 30 d a y s e a r l i e r w e r e a n a - e s t h e t i z e d b y e t h e r a n d k ille d b y e x s a n - g u i n a t i o n ( h e a r t p u n c t i o n ) . T h e w h o le b lo o d f r o m e a c h a n i m a l w a s d i s t r i b u t e d i n 3 tu b e s w i t h W a r r e n m e d iu m , f o r c u l tu r e .
A f t e r 30 d a y s a t 28°C t e m p e r a t u r e , t h e c u l t u r e s w e re s e a r c h e d f o r T r y p a n o s o m a
c r u z i, t h r o u g h m ic r o s c o p ic e x a m i n a t i o n o f a d r o p o f t h e m e d iu m . W h e n n e g a ti v e , t h e e x a m i n a t i o n w a s r e p e a t e d a t t h e e n d of 45 d a y s . A t t h i s t i m e t h e c u l t u r e m e d iu m w a s c e n t r i f u g e d f o r 15 m i n u t e s a t 1,500 r p m a n d t h e s e d i m e n t e x a m in e d .
45 d a y s a f t e r t h e f i r s t v a c c i n a t i o n t h e r e m a i n i n g 60 p r i m e d a n i m a i s w e re b o o s te d b y s u b c u t a n e o u s r o u t e , w i t h 5 x 105 P F p a r a s i t e s o b t a i n e d b y t h e s a m e s t e p s a s
f o r t h e f i r s t v a c c i n e .
60, 90, 120, 270 a n d 360 d a y s a f t e r t h e f i r s t v a c c i n a t i o n t h e s u r v iv in g m ic e , f r o m e a c h g r o u p o f 10 w e r e k ille d a n d t h e w h o le b lo o d c u l t i v a t e d a n d e x a m i n e d a s d e s c rib - e d p r e v io u s ly .
T h e 7 r e m a i n i n g a n i m a i s o f t h e 360 d a y s v a c c i n a t e d g r o u p , a n d t h e o n ly 3 s u r v iv in g m ic e o f t h e c o r r e s p o n d i n g i n t a c t c o n t r o l g r o u p , w e re i n f e c t e d w i t h b lo o d f o r m s o f t h e v i r u l e n t Y s t r a i n a s m e n t i o n e d f o r t h e f i r s t 30 d a y s v a c c i n a t e d m i c e .
D e t e r m i n a t i o n s o f p a r a s i t e m i a w e r e p e r f o r m e d 8, 15, 30 a n d 60 d a y s a f t e r t h e i n f e c t io n . 120, 270 a n d 360 d a y s a f t e r t h e b e g in n in g o f t h e e x p e r i m e n t , t h e r e m a i n in g c o n t r o l g r o u p s o f n o r m a l i n t a c t m ic e w e re k ille d a n d t h e m a i n i n t e r n a i o r g a n s s a v e d f o r g r o s s a n d m ic r o s c o p ic e x a m i n a t i o n a n d f o r c o m p a r i s o n w i t h i t s e q u iv a - l e n t v a c c i n a t e d g ro u p s .
F r o m t h e m a j o r i t y o f t h e a n i m a i s u s e d i n t h i s e x p e r i m e n t f r a g m e n t s o f to n g u e , eo sQ p h a g u s, l ú n g s , h e a r t , liv e r , s p lè e n , a d r e
-n a l g la -n d s , k i d -n e y , a b d o m i -n a l b r o w -n a d i- p o s e t is s u e , u r i n a r y b l a d d e r , l a r g e a n d s m a l l i n t e s t i n e a n d s k e l e t a l m u s c le w e r e f i x e d in 10% f o r m a l i n s o lu tio n . P a r a f f i n s e c tio n s o f t h e s e d i f f e r e n t o r g a n s a n d t i s s u e s w e r e s t a i n e d b y H e m a to x y l i n & E o s in , M a llo ry p h o s p h o t u n g s t i c t r i c h r o m i c s t a i n a n d b y P e r io d ic A c id S c h i f f s t a i n .
C a r e f u l s e a r c h f o r p a r a s i t e s w a s d o n e i n a m e a n o f 12 s e c ti o n s o f e a c h o f t h e a f o r e m e n t i o n e d o r g a n s a n d tis s u e s .
A d e t a i l e d d e s c r i p ti o n o f t h e h is to lo g ic a l f i n d i n g s w ill b e t h e s u b j e c t o f a n o t h e r p a - p e r .
R E S U L T S
T h e r e s u l t s o f t h i s e x p e r i m e n t a l w o rk c a n b e s u m m a r i z e d a s fo llo w s :
1) a l i t h e a n i m a i s g a v e n e g a t i v e b lo o d c u l t u r e s f r o m 30 t o 360 d a y s a f t e r v a c c i n a t i o n ( T a b le I ) ;
2) i n s p i t e o f t h i s n e g a ti v i t y , m ic e c h a l l e n g e d a t 30 a n d 360 d a y s a f t e r v a c c i n a t i o n w e r e p r o t e c t e d ( T a b le s I I a n d I V ) ;
3) i n a l i t h e v a c c i n a t e d g r o u p s t h e h e a r t w e ig h t w a s e q u a l, o r i n f e r i o r , to t h a t o f t h e r e s p e c t i v e n o r m a l c o n t r o l ( T a b le I I I ) ;
4) t h e s p le e n w e ig h t o f t h e 120 a n d 270 d a y s v a c c i n a t e d m ic e w a s g r e a t e r t h a n t h a t o f t h e r e s p e c t i v e i n t a c t c o n t r o l a n i m a i s ( T a b le I I I ) ;
5) n o g r o s s a l t e r a t i o n s w e r e o b s e r v e d i n t h e h e a r t , o e s o p h a g u s , l a r g e a n d s m a l l i n t e s t i n e o f t h e 120, 270 a n d 360 id ays v a c c i n a t e d a n i m a i s w h e n c o m p a r e d w i t h t h e r e s p e c t i v e n o r m a l i n t a c t g r o u p s (F ig s . 1 a n d 2 );
H - l l i m g S - 1 7 & » gmS ~ l7 £ m g m£ S . l .
37r .f t - i 3 7 ia g . S - l ^ i á g V-íníjgtiv1;;
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Jan.-Fev., 1975
Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
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F l g . 2 — O r g a n s o f n o r m a l i n t a - c t m i c e w i t h t h e s a m e a g e o f t h o s e s h o w n i n t h e P i g . 1, o r d e r e d b y t h e h e a r t w e i g h t .
H = h e a r t ( v e n t r i c u l a r m a s s ) ; S = s p l e e n ; E = e s o p h a g u s ; S . i . = s m a l l i n t e s t i n e a n d L . i . = l a r g e i n t e s t i n e .
6) n o p a r a s i t e s w e re f o u n d i n t h e h i s - to lo g ic a l s e c tio n s e x a m i n e d ;
7) i n a l i v a c c i n a t e d a n i m a i s a s m a ll h e p a t i c a c c u m u l a t i o n o f h i s t io c y te s , l y m - p h o c y te s , p l a s m o c y t e s a n d s o m e tim e s n e u - t r o p h i l s w a s o b s e r v e d , b u t. t h i s le s io n w a s s e e n , i n s m a l l p r o p o r tí o n , i n n o r m a l i n t a c t m ic e to o .
D IS C U S S IO N
T h e g r e a t e r e f f e c ti v e n e s s o f liv e o r a t - t e n u a t e d v a c c in e s d e m o n s t r a t e d b y t h e g r e a t e r d e g r e e o f p r o t e c t i o n a n d t h e l o n - g e r d u r a t i o n o f t h e i m m u n i t y is w e ll k n o w n , a l t h o u g h t h e e n h a n c e m e n t o f t h i s e f f i c a c y is n o t y e t c l e a r (3 ).
T h e d o s e - r e s p o n s e r e l a t i o n s h i p b e tw e e n a n t i g e n c o n c e n t r a t i o n a n d t h e r e s u l- t a n t i m m u n e r e s p o n s e is a ls o d e s c r ib e d i n a l i m o d e r n t e x t b o o k s o f I m m u n o lo g y .
T h e d e v e lo p m e n t o f im m u n o lo g ic a l t o - l e r a n c e b y “ lo w d o s e ” o r “h i g h d o s e ” o f a n t i g e n s h a s b e e n t h e s u b j e c t o f s e v e r a l p u b l i c a t i o n s (13; 11, 5, 9; 19) a n d m u s t b e c o n s id e r e d e v e r y t i m e w e i n t e n d to i n d u c e a n i m m u n e r e s p o n s e i n a d e t e r m i n e d a n i m a l s p e c ie s w i t h a s p e c if ic a n t i g e n , p a r t i - c u l a r y i f t h e a n t i g e n is a liv e m i c r o - o r g a - n is m .
I n a p r e v io u s p a p e r , a s a l r e a d y m e n - tio n e d , I d e m o n s t r a t e d t h a t s u b c u t a n e o u s i n j e c t i o n o f 3 x 10- p a r a s i t e s o f t h e P F s t r a i n w a s a b le t o i n d u c e a n e f f i c i e n t p r o t e c t i o n i n m ic e a g a i n s t a c h a ll e n g e t h a t k i lle d 80% o f t h e c o n t r o l m ic e (14 ).
L a t e r c n w i t h t h e u s e o f i m m u n o s u p - p r e s s iv e d r u g s I c o n f ir m e d t h e n o n v i r u
-le n c e o f t h e m e n t i o n e d T r y p a n o s o m a c r u z i s t r a i n (16; 17) .
C h i a r i (7) i n a c o m p a r a tiv e s t u d y o f t í i f f e r e n t T . c r u z i s t r a i n s , i n j e c t e d i n 86% o f t h e i r 65 m ic e , 14g b o d y w e ig h t, f r o m 2 m illio n s t o 100 m illio n s o f liv e P F p a r a s i t e s p e r i n t r a p e r i t o n e a l r o u te .
I t m u s t b e e m p h a s i z e d t h a t t h e i n v e s - t i g a t o r (7) m a k e s r e f e r e n c e o n ly to t h e n u m b e r o f t r y p o m a s t i g o t e s b u t i t r e p r e - s e n t s o n ly 5% o f t h e t o t a l p a r a s i t e s i n j e c t e d i n e a c h a n i m a l (8 ).
E p i m a s t ig o t e s a r e so a n t i g e n i c a s t r y p o m a s t i g o te s (12 ; 18) a n d c a n n o t b e n e - g le c te d in a n e x p e r i m e n t lik e t h is .
30 d a y s a f t e r t h o s e m a s s iv e t r y p a n o s o - m o s e i n j e c t i o n s C h i a r i (7) f i n d s n o p a t e n t p a r a s i t e m i a , r e f e r s to n o m o r t a l i t y , p r e - s e n t s n o h is to lo g ic f i n d i n g s a n d o b t a i n s a m e a n o f 60% o f p o s itiv e b lo o d c u ltu r e s .
C o n s id e r in g o n ly t h e a n i m a i s in o c u la t- e d w i t h t h e P F s t r a i n w h o s e b lo o d w a s c u l t i v a t e d i n L I T m e d iu m ( T a b le s V a n d V I o f t h e C h i a r i ’s p a p e r (7) o n e c a n se e t h a t 2 m illio n s o f i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t e d p a r a s i t e s g a v e 75% o f p o s itiv e b lo o d c u l t u - r e s ( 3 /4 ) , t h e s a m e p e r c e n t a g e o b t a i n e d w i t h t h e i n t r a p e r i t o n e a l i n j e c t i o n o f 100 m illio n s o f t h e s a m e p a r a s i t e s (1 5 /2 0 ).
S o i t is a d m is s ib le t o c o n s i d e r a n o t h e r c a u s e t h a n t h e i n f e c t i v i t y o f t h e p a r a s i t e s a s r e s p o n s i b l e f o r t h e p o s itiv ity o f t h e b lo o d c u l t u r e s . I n c o n s e q u e n c e o f t h e e n o r m o u s a m o u n t o f p a r a s i t e s i n j e c t e d a n d t h e r o u t e e m p lo y e d , t h e m o s t p r o b a - b le a r g u m e n t m u s t b e t h e d e v e lo p m e n t o f a n i m m u n o t o l e r a n t s t a t e .
I t is a p r o p r i a t e t o c a ll a t t e n t i o n , o n c e m o r e , to t h e f a c t t h a t t h e e x is te n c e o f a t r y p a n o s o m e p o s itiv e b lo o d c u l t u r e , p a r - t i c u l a r y i n t h e s e c i r c u m s t a n c e s , is n o a c - c e p ta b l e e v id e n c e o f i t s p a t h o g e n i c it y . T h i s m u s t in v o lv e : 1) t h e r a t e o f i n f e c t io n ( i n j e c t e d a n i m a l s / i n f e c t e d a n i m a i s ) ; 2) t h e d u r a t i o n o f t h e p r e p a t e n t p e r io d ; 3) t h e i n t e n s i t y o f t h e p a r a s i t e m i a ; 4) t h e d u r a t i o n o f t h e a c u t e p h a s e ; 5) t h e r a t e o f m o r t a l i t y a n d 6) t h e d e g r e e o f t i s s u l a r p a r a s i t i s m (2 1 ).
H u n g e r e r (12) i n j e c t i n g e p i m a s tig o te s o f T . c r u z i i n t o t h y m u s l e s s n u / n u m ic e g o t p o s itiv e b lo o d c u l t u r e s w i t h n o o t h e r e v i d e n c e o f i n f e c t io n .
4
Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
Vol. IX — N? 1
u s e d in a n a r r o w r a n g e o f d o s e s t o h a v e t h e le a s t h a r m f u l e f f e c t p o s s ib le o n t h e p a t e n t . W h e n t h e im m u n o lo g is ts r e c o m - m e n d 3 x lOOmg o f B C G b y o r a l r o u t e to a c h ild o r 50m g p e r i n t r a d e r m i c r o u t e , t h e p e d i a t r ic ia n m u s t n o t u s e 3,000g o r 5 00m g re s p e c tiv e ly b e c a u s e t h e r e s u l t s w o u ld s u - r e ly b e d is a s tr o u s . E v e r y i n t e r n i s t k n o w s t h e d a n g e r o f e m p lo in g , e v e n i n o p t i m a l d oses, live v a c c in e s d u r i n g t h e u s e o f im - m u n o d e p re s s iv e d r u g s o r in t h e c a s e s o f in fe c tio u s d is e a s e .
A n o th e r p o i n t in t h e w o rk o f C h i a r i (7) o n w h ic h I w o u ld lik e t o m a k e s o m e r e m a r k s is t h a t c o n c e r n e d w i t h t h e c u l- t u r e m ed iu m .
H e s ta te s t h a t t h e L I T m e d i u m g iv es b e t t e r re s u lts t h a n t h e W a r r e n m e d iu m . I n a n u n p u b lis h e d w o rk , R o s a R ib e ir o a n d m y self, w o rk in g w i t h 60 a l b i n o m ic e i n j e c t ed b y s u b c u ta n e o u s r o u t e w i t h 5 x 10T P F p a r a s ite s , m a d e c u l t u r e s o f b lo o d a n d m a - c e r a te o f h e a r t , s p le e n a n d liv e r i n b o t h m e d ia .
T h e c u ltu r e s w e re d o n e i n g r o u p s o f 10 a n im a is fro m 15 t o 120 d a y s a f t e r v a c c i- n a tio n .
W e g o t o n ly p o s itiv e c a s e s i n t h e W a r r e n m e d iu m (8 % ) a n d 4 i n t h e L I T ( 7 % ) . 3 o f t h e p o s itiv e c a s e s w e re o b t a i n e d in t h e 15 d a y o f v a c c i n a t i o n . O n e c a s e w a s
d e t e c t e d b y t h e L I T m e d i u m a n d n o t b y t h e W a r r e n b u t o n t h e o t h e r h a n d 2 w e re p o s itiv e i n t h e W a r r e n a n d n e g a t i v e i n t h e L I T m e d iu m .
B e t t e r r e s u l t s w e r e s e e n b y A l b u q u e r q u e e t a is (1) f r o m t h e W a r r e n t h a n t h e L IT , c o m p a r i n g t h e r e s u l t s o f h u m a n c h r o n - ic c a s e s o f C h a g a s d is e a s e .
S o I d i d n o t f i n d a n y a d v a n t a g e s i n s u b s t i t u t i n g t h e W a r r e n b y t h e L I T m e d iu m .
C O N C L U S IO N S
F r o m t h e d a t a o f t h i s e x p e r i m e n t a n d o f s e v e r a l o t h e r s (14; 18) I c a n c o n c lu d e t h a t t h e P F c u l t i v a t e d s t r a i n o f T r y p a n o - 1
s o m a c r u z i, w h e n g iv e n b y t h e a p p r o p i a t e r o u t e , i n a d e q u a t e d o s e s ( a s i t is a ls o d o n e i n a l i o t h e r liv e v a c c i n e s ) , is a b l e to in d u c e a n e f f i c i e n t s t e r i l e i m m u n i z a t i o n i n m ic e a g a i n s t a c h a ll e n g e w i t h a v i r u l e n t s t r a i n o f t h e s a m e p a r a s i t e . T h i s i m m u n i t y r e - m a i n s f o r a lo n g t i m e - o n e y e a r a t l e a s t - f o r m ic e .
N o m e g a s c o u ld b e d e t e c t e d i n t h e lo n g t e r m v a c c i n a t e d a n i m a i s w h o s e i n t e r n a i o r g a n s , e x c e p t t h e s p l e e n i n tw o g r o u p s , w e r e s i m i l a r o r s m a l l e r t h a n t h o s e o f t h e i n t a c t n o r m a l m ic e o f t h e s a m e a g e , m a i n - t a i n e d u n d e r t h e s a m e fo o d a n d a m b i e n t a l c o n d itio n s .
R E S U M O
T r y p a n o s o m a c r u z i d a c e p a P F q u a n d o i n j e t a d o e m c a m u n d o n g o s , p o r v ia
s u b c u t â n e a , e m d o s e s a d e q u a d a s , p r o d u z i m u n i d a d e e f i c i e n t e e d u r a d o u r a ( u m a n o p e lo m e n o s ) , s e m q u e s e t e n h a p o d i d o i d e n t i f i c a r i n f e c ç ã o o u i n f e c ç ã o
--d o e n ç a p o r m e io d e h e m o c u l t u r a s e e s t u d o s h i s t o p a to l ó g i c o s .
O A u t o r t e c e c o n s i d e r a ç õ e s s o b r e r e s u l t a d o s a p a r e n t e m e n t e d i s c r e p a n t e s
o b t id o s p o r o u t r o p e s q u i s a d o r (7 - 8 ), c o n c l u i n d o p e l a i m p r o p r i e d a d e d o
m é to d o u t i l i z a d o p o r e s t e p a r a o b t e r u m e s t a d o d e i m u n i d a d e e s te r il.
C o r r o b o r a n d o s u a s o b s e r v a ç õ e s e e x p e r i m e n t a ç õ e s a n t e r i o r e s , o A u t o r c o n -c lu e p e la e f i -c á -c ia d a -c e p a r e f e r i d a -c o m o m e i o d e s e o b t e r i m u n i z a ç ã o a t i v a c o n t r a a t r i p a n o s o m o s e a m e r i c a n a e x p e r i m e n t a l .
R E F E R E N C E S
1. A L B U Q U E R Q U E , R . D . R . ; F E R N A N - 2. D E S , L . A . R . , F U N A Y A M A , G . K . , F E R R IO L I F .° , F . & S IQ U E IR A , A .F . — H e m o c u ltu r a s s e r i a d a s c o m o m e io d e W a r r e n e m p a c i e n t e s c o m r e a ç ã o 3 . d e G u e r r e i r o & M a c h a d o p o s itiv a .
R e v . In W . M e d . T r o p . S ã o P a u lo , 14:
1-5, 1972. 4 .
B A R R E T , J . T . — T e x tb o o k o f I m - m u n o lo g y . T h e C .V . M o sb y C o . S t . L o u is. 1970.
B E L L A N T I, J . A . — I m m u n o lo g y . W . B . S a u n d e r s . P h i l a d e l p h i a . 1971.
Jan.-Fev., 1975__________ Rev. Soc. Bras. Med. Trop.
5
& VAZ, N .M . — I m u n o l o g i a b á s ic a e a p l i c a d a . G u a n a b a r a — K o o g a n , R io , 1973.
5. B IR O , C . — T o l e r â n c i a I m u n o ló g ic a .
R e v . L a t . A m e r . M ic r o b io l., 1 2 : 237
-242 , 1970.
6 . B R E N E R , Z . — C o n t r i b u iç ã o a o e s t u d o d a t e r a p ê u t i c a e x p e r i m e n t a l d a d o e n ç a d e C h a g a s . F a c . O d o n t. F a r m . U n iv . M . G e r a is . B e lo H o r iz o n te . T es e , 1961.
7 . C H 1 A R I, E . — I n f e c t i v i t y o f T r y p a
n o s o m a c r u z i m e ta c y c lic t r y p o m a s t i -
g o t e s f r o m c u l t u r e s k e p t i n l a b o r a t o r y f o r d i f f e r e n t p e r io d s o f tim e . R e v .
I n s t . M e d . T r o p . S ã o P a u lo , 1 6 : 61-67,
1974.
8 . C H IA R I. E . — G r o w t h a n d d i f f e r e n - t i a t i o n o f T r y p a n o s o m a c r u z i c u l t u r e s f o r m s k e p t in l a b o r a t o r y f o r d i f r e - r e n t e p e r io d s o f tim e . R e v . I n s t . M e d .
T r o p . S ã o P a u lo , 1 6 : 81-87, 1974.
9 . C R O W L E , A . J . — T h e r o le o f i m m u - n o lo g ic t o l e r a n c e i n im m u n o lo g ic r e s p o n s e . A n n . A lle r g y , 24: 195-214, 1966.
10. H A R T M A N , A . F . — T h e o r y a n d p r a c - tic e o f p a r e n t e r a l f l u i d a d m i n i s t r a - tio n . J . A . M . A . , 10 3 : 1349-1354, 1934.
11. H U M P H R E Y , J . H . & W H IT E , R .G . — I m u n o l o g i a M é d ic a . G u a n a b a r a - K o - o g a n , R io , 1972.
12. H U N G E R E R , Y .D . — I m m u n o lo g y of e x p e r i m e n t a l C h a g a s d is e a s e . C o n f e r ê n c i a D e p . M ed . P r e v . P a c . M ed - U n iv . S ã o P a u lo , 1 1-2-1972.
13. L A N D Y , M . & B R A U N , W . — E d . — I m m u n o l o g ic a l t o l e r a n c e . A c a d e m i c
P r e s s , N . Y o r k , 1969.
14. M E N E Z E S , H . — I m u n i z a ç ã o d e c a - m u n d o n g o s c o m “ v a c i n a ” v iv a a v i r u
-l e n t a d e T r y p a n o s o m a a c r u z i . I — E n s a i o d e a v a li a ç ã o d o m e n o r in ó c u lo e f ic ie n te . R e v . S o c . B r a s . M e d . T r o p ..
3 : 297-303, 1969.
15. M E N E Z E S , H . — I I I . T h e a v ir u le n c e o f t h e c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f T r y p a
n o s o m a c r u z i. R e v . I n s t . M e d . T r o p .
S ã o P a u lo , 1 3 : 14-17, 1971.
16. M E N E Z E S , H . — T h e a v i r u l e n c e o f t h e c u l t i v a t e d Y s t r a i n o f T r y p a n o
s o m a c r u z i. IV — T h e e f f e c t o f im -
m u n o s u p p r e s s i v e a g e n t s i n m ic e . R e v .
S o c . B r a s . M e d . T r o p ., 4 : 21 3-233, 1972.
17. M E N E Z E S , H . — T h e a v i r u l e n c e of t h e c u l t i v a t e d P F s t r a i n o f T r y p a n o
s o m a c r u z i : V I I — T h e e f f e c t o f a n - t i ly m p h o c y t i c s e r u m i n d o g s. R e v . S o c . B r a s . M e d . T r o p . ( i n p r e s s ) .
18. M E N E Z E S , H . — T h e p r o t e c t iv e e f f e c t o f t h e e p i m a s t i g o t e s f o r m s o f t h e
P F s t r a i n o f T r y p a n o s o m a c r u z i a g a - i n s t a v i r u l e n t h o m o lo g o u s in f e c tio n .
R e v . S o c . B r a s . M e d . T r o p . ( in p r e s s ) .
19. M IT C H IS O N , N .A . — I n t r o d u c t i o n o f im m u n o lo g ic a l p a r a l y s i s i n tw o z o n e s o f d o s a g e . P r o c . R o y . S o c . ( B io l.) , 161: 275-292, 1964.
2 0. N A K A M U R A , M . — C u l ti v a t i o n o f
T r y p a n o s o m a c r u z i in a P r o t e i n - F r e e d i a l y s a t e m e d iu m . — P r o c . S o c . E x p .
B io l. M e d ., 1 25: 779-780, 1967.
2 1. R IB E IR O , R . D . — C o n tr ib u iç ã o p a r a o e s tu d o d a i n f e c ç ã o n a t u r a l d e r o e d o r e s b r a s il e i r o s p e lo T r y p a n o s o m a
c r u z i. F a c . F a r m . O d o n to . R ib . P r e to .
T e s e . 1971.
22. W A R R E N , L . G . — M e ta b o lis m o f
S c h i z o t r y p a n u m c r u z i, C h a g a s . I —
E f f e c t o f c u l t u r e a g e a n d s u b s t r a t e c o n c e n t r a t i o n o n r e s p i r a t o r y r a t e . J .
T A H L E I — . R e s u l t s f r o m i n o c u l a t i o n i n m ic e , b y s u b c u t a n e o u s r o u t e , o f P F p a r a s i t e s . T h r e e b lo o d c u l t u r e s t u b e s p e r e a c h a n i m a l .
D a y s a f t e r
n u m b e r o f
l st d o s e 6 x 103 p a r a s i t e s s. c. r o u t e
2 mI d o s e 5 x 105 p a r a s i t e s s . c. r o u t e
B lo o d c u l t u r e ( W a r r e n m e d iu m )
( A n im a l p o s l t i v e / i n o c u l a t e d ) H is t o p a t h o l o g y
P a r a s i t e s i n t is s u e s
O b s. v a c c i n a t i o n a n i m a i s
a f t e r 30 d a y s a f t e r 45 d a y s
30 10 10 0 /1 0 0 /1 0 —
60 10 10 10 0 /1 0 0 /1 0 —
90 10 10 9 0 /9 0 /9 — 1 d ie d 4 d a y s
a f t e r l st v a c c i n e
120 10 10 9 0 /7 0 /7 1 d ie d 6 d a y s
1 d ie d 85 d a y s 1 d ie d 90 d a y s a f t e r l 8t v a c c i n e
270 10 10 9 0 /9 0 /9 — 1 d ie d 1 d a y
a f t e r l st v a c c in e
360 10 10 9 0 /8 0 /8 — 1 d ie d 6 d a y s
1 d ie d 360 d a y s a f t e r l st v a c c i n e
T A B L E I I — P a r a s i t e m i a a n d m o r t a l i t y r a t e f r o m v a c c i n a t e d * a n d c o n t r o l m ic e i n f e c t e d , i n t r a p e r i t o n e a l l y , w i t h 5,000 p a r a s i t e s / g , “ Y ” v i r u l e n t s t r a i n o f T r y p a n o s o m a c r u z i.
M ic e
P a r a s i t e s i n 5 m m 3 o f b lo o d
D a y s a f t e r i n f e c t i o n
O bs.
8 15 30 60
1 v a c c i n a t e d 140 280 0 0
' 2 >> 0
0 0 0
3 *>
3,080 D ie d
4 >»
525 210 0 0
5 >»
480 2,345 0 0
6 525 525 0 0
7 >> 4,375 2,170
0 0
8 >>
315 0 0 0
9 630 D ie d
10 480 0 0 0
M E D IA N 502 245 0 0
M o r t a l i t y
( c u m u l a ti v e ) 0% 20% 20% 20%
1 c o n t r o l 4,375 2,380 140 0
2 3,920 1,990 D ie d
3 17,500 D ie d
4 i t
10,500 2,870 D ie d
5 5?
17,500 2,940 0 0
6 14,000 3,570 315 0
7 Í J
4,234 2,730 D ie d
8 4,320 D ie d
9 )>
5,670 3,780 D ie d
10 f y
4,025 D ie d
M E D IA N 5,022 2,870 0 0
M o r t a l i t y
( c u m u l a ti v e ) 0% 30% 70% 70%
T A B L E I I I — V a c c i n a t e d a n d n o r m a l m ic e m a i n t a i n e d a s C o n tro ls f o r m o r t a l i t y r a t e , b o d y , h e a r t a n d s p l e e n w e ig h t a n d f o r t h e m o r p h o l c g y o f t h e h o llo w i n t e r n a i v is c e r a .
N u m b e r o f m ic e
I n i t i a l b o d y w e ig h t ± s . d .
D u r a t i o n o f
F i n a l b o d y w e ig h t (g )
m e a n ± s. d .
H e a r t w e ig h t (m g ) m e a n ± s. d.
S lp e e n w e ig h t (m g ) m e a n ± s. d . C o n tr o l
(d a y s )
V a c c in . (d a y s )
T A B L E IV — P a r a s i t e m i a a n d m o r t a l i t y r a t e f r o m v a c c i n a t e d * a n d c o n t r o l a n i m a i s i n f e c t e d , i n t r a p e r i t o n e a l y , w i t h 5,000 p a r a s i t e s / g , Y v i r u l e n t s t r a i n o f
T r y p a n o s o m a c r u z i.
P a r a s i t e s i n 5 m m s o f b lo o d
M ice D a y s a f t e r i n f e c t i o n O b s e r v a tio n s
8 15 30 60
1 2
3 4 5 6
7 8 9
10
v a c c i n a t e d
)>
>>
i »
>>
9
ff
)t
5,215
3,640 350 1,225
665 0
0 0 0 0
0 0
0
0 0 0
0 0
0
0 0 0
0 0
0
D ie d
D ie d 360 d a y s a f t e r v a c c i n a t i o n
D ie d 47 d a y s a f t e r v a c c i n a t i o n
D ie d 330 d a y s a f t e r v a c c i n a t i o n
M E D IA N 665 0 0 0
M o r t a l i t y a f t e r i n f e c t .
( c u m u l a ti v e ) 0% 14% 14% 14%
M o r t a l i t y
b e f o r e i n f e c t . 30%
1 2
3 4
5
6
7 8
9
10
c o n t r o l
tf
>»
i j
ff
yt
j»
38.500
8,400
52.500
D ie d
D ie d 1 d a y b e f o r e i n f e c t i o n
D ie d
D ie d 60 d a y s b e f o r e i n f e c t i o n
D ie d 330 d a y s b e f o r e i n f e c t i o n
D ie d 60 d a y s b e f o r e i n f e c t i o n
D ie d
D ie d 330 d a y s b e f o r e i n f e c t i o n
D ie d 60 d a y s b e f o re i n f e c t i o n
D ie d 60 d a y s b e f o r e i n f e c t i o n
M E D IA N 38,500
M o r t a l i t y a f t e r i n f e c t .
( c u m u l a ti v e ) 0% 100% 100% 100%
M o r t a l i t y b e f o r e i n f e c t .
