R e v is t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 ( l ) : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3
T R Y P A N O S O M A C R U Z I
AND EXPERIMENTAL CHAGAS’
DISEASE: CHARACTERIZATION OF A STOCK ISOLATED
FROM A PATIENT WITH ASSOCIATED DIGESTIVE AND
CARDIAC FORM
E . C . O l i v e i r a , M . M . A . S t e f a n i , A . O . L u q u e t t i , E . F . V ê n c i o ,
M . A . R . M o r e i r a , C . S o u z a a n d J . M . R e z e n d e
A n e w T r y p a n o s o m a c r u z i s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t in th e c h r o n i c p h a s e o f C h a g a s ’ d i s e a s e w ith t h e d i g e s t i v e a n d c a r d i a c f o r t n o f t h e d i s e a s e w a s c h a r a c t e r i z e d b y e x p e r i m e n t a l in f e c ti o n in i s o g e n i c , s u s c e p t i b l e , A / S n s t r a i n m ic e . P a r a s i te m ia c u r v e s s h o w e d u p t o 1.7x1c/5
p a r a s i t e s / m l a n d n o m o r ta l it y w a s o b s e r v e d u p to 3 0 0 d a y s p o s t in fe c tio n . S p e c i f i c I g M w a s f o u n d in m i c e in t h e a c u te p h a s e u p to 4 0 d a y s a n d a ls o in t h e c h r o n i c p h a s e . I g G a n ti b o d ie s yv er e d e t e c t e d in t h e a c u te a n d c h r o n i c p h a s e . H i s t o p a th o l o g y e x a m in a ti o n d e m o n s t r a t e d m y o t r o p i s m t o t h e d i g e s t i v e t r a c t m u s c l e l a y e r s a n d to th e h e a r t.
K e y - w o r d s : T r y p a n o s o m a c r u z i s t r a in . C h a g a s 'd i s e a s e . E x p e r i m e n t a l in fe c tio n . S e r o l o g y . H i s t o p a t h o l o g y .
T r y p a n o s o m a c r u z i i s a n h e m o f l a g e l l a t e p r o t o z o a n t h a t c a u s e s C h a g a s ’ d i s e a s e w h i c h
p r o d u c e s d i f f e r e n t c l i n i c a i m a n i f e s t a t i o n s in
h u m a n s . M a n y p a t i e n t s r e m a i n a s y m p t o m a t i c in
th e i n d e t e r m i n a t e f o r m o f t h e d i s e a s e . A m o n g s t
th o s e s y m p t o m a t i c p a t i e n t s w h o d e v e lo p le s i o n s
1 0 - 2 0 y e a r s a f t e r t h e i n f e c t i o n , 2 0 - 3 0 % p r e s e n t t h e c a r d ia c f o r m 22 o f t h e d i s e a s e a n d a r o u n d 7 % h a v e
m e g a e s o p h a g u s 6 . T h e p r e v a l e n c e o f p a t i e n t s w i t h
m e g a c o l o n is n o t c l e a r u p t o n o w .
B e s i d e s t h e g e n e t i c v a r i a t i o n o f t h e h u m a n
h o s t , T. c r u z i h a s d e m o n s t r a t e d t o p r e s e n t i n t r a - s p e c if ic v a r i a t i o n 1 2 12. I n f e c t i v e p o p u l a t i o n o f
p a r a s i t e s m a y h a v e m a r k e d d i f f e r e n c e s i n r e la t io n
w i t h t i s s u e t r o p i s m , p a r a s i t e m i a , p a t h o g e n i c i t y
a n d v i r u l e n c e . T h i s h e t e r o g e n e i t y in t h e T. cru z i
p o p u l a t i o n m a y c o n t r i b u t e t o t h e d i f f e r e n t c l in i c a i
m a n i f e s t a t i o n s o b s e r v e d in t h e h u m a n p o p u l a t i o n 3
11. A p o s s i b l e l i n k b e t w e e n u n i q u e c h a r a c te r i s t ic s
o f t h e p a r a s i t e p o p u l a t i o n a n d t h e c l i n i c a i
m a n i f e s t a t i o n o f t h e h o s t h a s b e e n s e a r c h e d f o r ,
L a b o r a t ó r i o d e P e s q u i s a d a D o e n ç a d e C h a g a s , D e p a r t a m e n t o s d e P a r a s i t o l o g i a e d e I m u n o l o g i a / I n s t i t u t o d e P a t o l o g i a T r o p i c a l e S a ú d e P ú b l i c a ; D e p a r t a m e n t o s d e P a t o l o g i a e d e C l í n i c a M é d i c a , F a c u l d a d e d e M e d i c i n a / U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d e G o i á s , G o i â n i a , G O .
A d d r e s s t o: D r . A l e j a n d r o O . L u q u e t t i . L a b o r a t ó r i o d e P e s q u i s a d a D o e n ç a d e C h a g a s . H o s p i t a l d a s C l í n i c a s . C a i x a P o s t a l 1 0 3 1 , 7 4 0 0 1 - 9 7 0 G o i â n i a , G O .
R e c e b i d o p a r a p u b l i c a ç ã o e m 0 9 / 0 7 / 9 2 .
a f t e r s e v e r a l s t u d i e s 7 18 25. T h e h e t e r o g e n e i t y o f th e
p a r a s i t e p o p u l a t i o n c o u l d e x p l a i n t h e p r e d o m i n a n c e
o f c e r t a i n c l i n i c a i f o r m s i n d i f f e r e n t g e o g r a p h i c a l
r e g i o n s 2124. H o w e v e r t h e e x t e n t t o w h i c h t h e p a r a s i t e
; p o p u l a t i o n c o n t r i b u t e s t o t h e c l i n i c a i m a n i f e s t a ti o n s
o f t h e d i s e a s e is n o t c l e a r . C l a s s i f i c a t i o n o f T. cr u zi
s t r a i n s h a s b e e n b a s e d o n v a r i o u s c r i t e r i a s u c h a s
v i r u l e n c e , p a t h o g e n i c i t y , m o r p h o l o g y , is o e n z y m e s ,
; t i s s u e t r o p i s m , p a r a s i t e m i a , i m m u n e r e s p o n s e o f t h e
h o s t , a n t i g e n i c c o m p o s i t i o n a n d s u s c e p t i b i l i t y to
v a r i o u s c h e m o t h e r a p e u t i c c o m p o u n d s 1 13.
T h e s t u d y s u m m a r i z e s r e s u l t s c o n c e m i n g
e x p e r i m e n t a l i n f e c t i o n w i t h a s t o c k o f T. cru zi l i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w i t h t h e a s s o c i a t e d ( c a r d i a c
a n d d i g e s t i v e ) f o r m o f C h a g a s ’ d i s e a s e . T h e
e x p e r i m e n t a l i n f e c t i o n w a s a s s e s s e d i n t e r m s o f
p a r a s i te m ia , m o r t a l i t y , a n t i b o d y p r o d u c t i o n o f th e
h o s t a n d h i s t o p a t h o l o g i c a l l e s i o n s .
M A T E R I A L A N D M E T H O D S
S o u r c e o f p a r a s i t e s
T r i a t o m i n e b u g s f r o m x e n o d i a g n o s i s o f A . R . O . ,
3 5 y e a r s o l d , f r o m a n e n d e m i c r e g i o n ( P i r e n ó p o l i s ,
S t a t e o f G o i á s ) , c l i n i c a l l y , s e r o l o g i c a l l y a n d
p a r a s i t o l o g i c a l l y d i a g n o s e d t o h a v e C h a g a s ’ d i s e a s e
w a s e m p l o y e d a s t h e s o u r c e o f p a r a s i te s u s e d . C l in i c a i
m a n i f e s t a t i o n s o f t h e d i s e a s e i n c l u d e d c h a g a s i c
O l i v e i r a E C , S t e f a n i M M A , L u q u e t i A O , V ê n c io E F , M o r e i r a M A R , S o u z a C , R e z e n d e J M . T r y p a n o s o m a c r u z i a n d e x p e r i m e n t a l C h a g a s ' d i s e a s e : c h a r a c t e r i z a t i o n o f a s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w i t h a s s o c i a t e d d i g e s t i v e a n d c a r d i a c f o r m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3 .
c a r d i o p a t h y c h a r a c t e r i z e d o n t h e E K G b y r i g h t
b u n d l e b r a n c h b l o c k a n d a n t e r i o r l e f t b u n d l e b r a n c h
b l o c k . T h i s p a t i e n t h a d a n o r m a l c h e s t X - r a y a n d
w a s r a d io l o g i c a ll y c l a s s i f i e d to h a v e m e g a e s o p h a g u s
( g r o u p I I I ) a n d d o l i c o m e g a c o l o n . S e r o l o g i c a l
r e a c t i o n s f o r A m e r i c a n t r y p a n o s o m i a s i s w e r e
p o s i t iv e b y i n d i r e c t h e m a g g l u t i n a t i o n , i n d i r e c t
im m u n o f lu o r e s c e n c e , d i r e c t a g g l u t i n a t i o n w i t h 2 -
m e r c a p t o e t h a n o l a n d E L I S A . T h e p a t i e n t w a s
s u b m itte d to x e n o d i a g n o s i s e m p l o y i n g 4 0 T r ia to m a in festa n s b u g s . T h i r t y a n d s i x t y d a y s a f t e r th e b l o o d m e a l 5 o u t o f 3 4 b u g s w e r e d e m o n s t r a t e d to b e
p o s it iv e .
O b t e n t i o n o f p a r a s i t e s
I n f e c ti v e m e t a c y c l ic t r y p o m a s t i g o t e f o r m s w e r e
o b t a i n e d b y c o m p r e s s i o n o f t h e p o s t e r i o r g u t o f
p o s i t iv e T. in fe s ta n s b u g s . A s u s p e n s i o n o f p a r a s i te s d i l u t e d i n s a l i n e s o l u t i o n w a s i n o c u l a t e d
i n t r a p e r i t o n e a l l y i n t o s u s c e p t i b l e A / S n m i c e ( 4 - 6
w e e k s o l d , b o t h s e x ) . A f t e r 4 r e i n o c u l a t i o n s a h i g h
n u m b e r o f p a r a s i t e s w a s o b t a i n e d a n d u s e d b o t h f o r
t h e e x p e r i m e n t a n d f o r c r y o p r e s e r v a t i o n w i t h 1 0 %
F C S ( M i c r o b io l o g i c a , R i o d e J a n e ir o ) , 1 0 % g l y c e r o l
( M e r c k , R i o d e J a n e i r o ) a n d c o m p l e t e d w i t h R P M I -
1 6 4 0 ( G I B C O , U S A ) .
E x p e r i m e n t a l i n f e c t i o n
T h r e e g r o u p s o f 7 m a l e A / S n m ic e , 4 t o 6 w e e k s
o l d , w e i g h i n g b e t w e e n 13 a n d 1 8 g w e r e u s e d . T. cru zi t r y p o m a s t i g o t e s w e r e o b t a i n e d b y b l e e d i n g i n f e c te d m i c e b y t h e r e t r o - o r b i t a l s in u s . E a c h g r o u p
o f a n i m a i s w a s in f e c t e d i n t r a p e r i t o n e a l l y ( I . P . )
w i t h d i f f e r e n t i n o c u l a w h i c h w e r e a s f o l l o w s : 1 , 0 0 0
f o r m s / m o u s e i n g r o u p I , 1 0 , 0 0 0 f o r m s / m o u s e in
g r o u p I I a n d 1 0 0 , 0 0 0 f o r m s / m o u s e i n g r o u p I I I .
F o u r a n i m a i s i n t h e s a m e c o n d i t i o n s in o c u l a t e d
w i t h 0 . 2 m l o f s a l i n e I . P . w e r e u s e d a s a c o n t r o l
g r o u p .
P a r a s i t e m i a a n d m o r t a l i t y
D a i l y e x a m i n a t i o n s o f p a r a s i t e m i a w e r e
p e r f o r m e d u p t o 1 4 d a y s o f t h e i n f e c t i o n a n d th e n
e a c h o t h e r d a y u n t i l n e g a t i v a t i o n w a s o b s e r v e d .
P a r a s i t e s w e r e c o u n t e d a c c o r d i n g t o t h e t e c h n i q u e
p r o p o s e d b y B r e n e r 2 w h i c h a n a li s e s 5/xl o f i n f e c te d
b l o o d u n d e r a c o v e r s l i p o f 2 2 x 2 2 m m w i t h 4 0 0 x
m a g n i f i c a ti o n . M o r t a l i t y w a s c h e c k e d d a i l y .
S e r o l o g i c a l p r o f i l e
A n i m a i s w e r e b l e d b y t h e r e t r o - o r b i t a l s i n u s o n
d a y s 5 , 1 0 , 1 5 , 2 0 , 3 0 , 4 0 , 5 0 , 6 0 , 9 0 , 1 2 0 , 1 5 0 ,
1 8 0 , 2 1 0 a n d 3 0 0 p o s t i n f e c t i o n . B l o o d f r o m a t l e a s t
3 a n i m a i s f r o m e a c h g r o u p w a s p o o l e d a n d s e r a
w e r e t e s t e d b y i n d i r e c t i m m u n o f l u o r e s c e n c e
e m p l o y i n g a n t i m o u s e I g M ( C a p p e l L a b o r a t o r i e s ,
C o c h r a n v i l l e , U S A ) c o n j u g a t e d w i t h r h o d a m i n e
a n d a n t i m o u s e I g G ( P a s t e u r I n s t i t u t e , P a r i s )
c o n j u g a t e d w i t h f l u o r e s c e i n . S e r a w e r e d i l u t e d
f r o m 1 :5 u p t o 1 : 6 4 0 f o r I g M a n d f r o m 1 : 2 0 u p t o
1 : 6 4 0 f o r I g G .
H i s t o p a t h o l o g i c a l e x a m i n a t i o n s
O n e a n i m a l f r o m e a c h g r o u p w a s s a c r i f i c e d o n
d a y s 4 0 , 6 0 , 9 0 , 1 8 0 , 2 1 0 , 3 0 0 a n d 4 2 0 ( o n l y o n e
a n i m a l o f g r o u p I ) e m p l o y i n g e t h e r . T i s s u e s a m p l e s
w e r e f i x e d w i t h b u f f e r e d f o r m a l d e h y d e 1 0 % ( v / v ) ,
p H 7 . 0 , c u t in t o 4 /um t h i c k , s t a i n e d b y h e m a t o x i l i n -
e o s i n a n d a n a ly s e d w i t h m a g n i f i c a t i o n s o f 2 0 , 4 0
a n d lO O x w h e n e v e r n e c e s s a r y . U n d e r s u s p i c i o n o f
f i b r o s i s , t r i c h r o m i c M a s s o n s t a i n i n g w a s e m p l o y e d
f o r b e t t e r i d e n t i f i c a t i o n . A n a l y s i s o f t i s s u e s i n c l u d e d
t h e id e n t i f i c a t i o n o f p a r a s i t e s , i n t e n s i t y o f p a r a s i t i s m
a n d t y p e o f i n f l a m m a t o r y r e a c t i o n . T h e f o l l o w i n g
o r g a n s a n d t i s s u e s w e r e e x a m i n e d : li v e r , s p l e e n ,
l y m p h n o d e s , l u n g s , k i d n e y s , t e s t i s , e p i d i d y m u s ,
a d r e n a l g l a n d s , f a t t i s s u e ( m e s e n t e r y ) , e s o p h a g u s ,
s t o m a c h , s m a l l i n t e s t i n e a n d b o w e l , s t r i a t e d m u s c l e
a n d h e a r t ( t h e w h o l e o r g a n ) .
R E S U L T S
P a r a s i t e m i a a n d p e a k o f i n f e c t i o n
P a r a s it e s w e r e f o u n d i n a n i m a i s o f g r o u p I
( l o w e s t i n o c u l u m ) o n t h e lO th d a y p o s t i n f e c t i o n ;
i n g r o u p I I ( i n t e r m e d i a t e i n o c u l u m ) t h e r e w a s o n e
p o s i t i v e a n i m a l o n t h e f i r s t d a y p o s t i n f e c t i o n ; i n
g r o u p I I I ( h i g h e s t i n o c u l u m ) a l i a n i m a i s w e r e
p o s i t i v e o n t h e f i r s t d a y p o s t i n f e c t i o n ( F i g u r e 1 ).
A d i r e c t c o r r e l a t i o n w a s o b s e r v e d b e t w e e n t h e
i n o c u l u m a n d p e a k o f p a r a s i t e m i a : t h e h i g h e s t t h e
O liv e ir a E C , S t e f a n i M M A , L u q u e t i A O , V ê n c io E F , M o r e i r a M A R , S o u z a C , R e z e n d e J M . T r y p a n o s o m a c r u z i a n d e x p e r i m e n t a l C h a g a s ' d i s e a s e : c h a r a c t e r i z a t i o n o f a s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w it h a s s o c i a t e d d i g e s t i v e a n d c a r d i a c f o r m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3 .
Parasites/ml
Days post infection
Inocula
= -«-1000 -àr 10000 & 100000
F ig u r e 1 - P a r a s i t e m i a c u r v e s w ith d i f f e r e n t in o c u la .
( g r o u p I I I 1 . 7 x l 0 6 p a r a s i t e s / m l o n t h e d a y 1 4 th ) . A
s in g le p e a k w a s o b s e r v e d i n e a c h g r o u p . P e a k o f
p a r a s i te m ia in g r o u p I I o c c u r r e d o n t h e 2 0 t h d a y
p o s t i n f e c t i o n w i t h 0 . 5 8 x l 0 6 p a r a s i t e s / m l ; in g r o u p
I p a r a s i t e m i a p e a k e d o n t h e 2 4 t h d a y w i t h 0 . 3 5 x l 0 6
p a r a s i t e s / m l . F o l l o w i n g t h e p e a k t h e r e w a s
n e g a ti v a ti o n o f t h e p a r a s i t e m i a w h i c h s t a r t e d o n
2 4 th d a y p o s t i n f e c t i o n i n g r o u p I I a n d I I I a n d o n
2 8 t h d a y in a n i m a i s f r o m g r o u p I . C o m p le te
n e g a t i v a t i o n w a s o b s e r v e d o n t h e 4 6 th a n d 5 0 t h d a y
p o s t i n f e c t i o n i n t h e a n i m a i s i n f e c t e d w i t h th e
i n t e r m e d i a t e a n d l o w e s t i n o c u l a r e s p e c t i v e l y . O n e
a n i m a l b e l o n g i n g t o t h e g r o u p o f t h e h i g h e s t
i n o c u l u m r e m a i n e d p o s i t i v e u p to 8 8 d a y s p o s t
i n f e c t i o n . T h e r e w a s n o m o r t a l i t y d u r i n g t h e a c u te
p h a s e . O n e a n i m a l f r o m t h e g r o u p I I I a n d a n o t h e r
f r o m g r o u p I I d i e d o n d a y s 3 1 6 a n d 3 9 0 p o s t
i n f e c t i o n , r e s p e c t i v e l y . C o n t r o l m i c e w e r e a l i v e u p
to 4 2 0 d a y w h e n t h e y w e r e s a c r i f i c e d a n d t h e i r
o r g a n s e x a m i n e d .
Serological profile
S p e c i f i c I g M a n t i b o d i e s w e r e d e t e c t e d 5 d a y s
a f t e r i n f e c t i o n i n g r o u p I a n d I I ( t i t e r 1 /1 0 ) . F o r th e
l o w e s t i n o c u l u m th e y p e r s i s t e d t h r o u g h a l i th e
o b s e r v a t i o n w i t h p e a k s o n d a y s 1 5 , 3 0 , 9 0 a n d 3 0 0
( F i g u r e 2 ) .
I g G a n t i b o d i e s w e r e d e m o n s t r a t e d e a r l i e r ( 3 0
d a y s ) in t h e g r o u p o f h i g h e s t i n o c u l u m - g r o u p I I I
- ( t i t e r 1 /2 0 ) . T h e o t h e r g r o u p s ( I a n d I I ) b e c a m e
p o s i t i v e a f t e r 5 0 d a y s o f i n f e c t i o n ( F i g u r e 3 ) a n d
r e m a i n e d p o s i t i v e f o r a l i s a m p l e s t e s te d .
Histopathological examination
P a r a s i t e p s e u d o c y s t s w e r e f o u n d i n t h e h e a r t ,
k i d n e y , f a t t i s s u e a n d d i g e s t i v e t r a c t i n a n i m a i s
w h i c h w e r e s a c r i f i c e d u p t o 6 0 d a y s a f t e r i n f e c t io n
( T a b le 1 ). H e t e r o g e n e o u s p a t t e m s o f r e a c t i o n w e r e
o b s e r v e d a m o n g s t d i f f e r e n t o r g a n s a n d b e t w e e n
d i f f e r e n t s e c t i o n s w i t h i n a s i n g l e o r g a n e x a m i n e d .
M o s t p r o e m i n e n t i n f l a m m a t o r y l e s i o n s w e r e
o b s e r v e d i n t h e m u s c l e l a y e r o f d i g e s t i v e t r a c t
( F i g u r e 4 ) . T h e s e a l t e r a t i o n s w e r e o f t h e s a m e
i n t e n s i t y a l o n g t h e e s o p h a g u s , s t o m a c h , s m a l l a n d
l a r g e i n t e s t i n e . I n f i l t r a t e w a s m o s t l y l y m p h o -
h i s t i o p l a s m a c y t i c h o w e v e r n e u t r o p h i l s a n d
e o s i n o p h i l s w e r e d e t e c t e d i n c e r t a i n a r e a s .
O l i v e i r a E C , S t e f a n i M M A , L u q u e t i A O , V ê n c io E F , M o r e i r a M A R , S o u z a C , R e z e n d e J M . T r y p a n o s o m a c r u z i a n d e x p e r i m e n t a l C h a g a s ' d i s e a s e : c h a r a c t e r i z a t i o n o f a s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w i t h a s s o c i a t e d d i g e s t i v e a n d c a r d i a c f o r m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3 .
TITER
1000
100
n
i
i
i
i
i
i
i
i
i
r
5
10 15 20
30 40 50 60 90 120 150 180 210 300
DAYS POST INFECTION
INOCULA 0 1 0 0 0 1110000 ■ 100000
F ig u r e 2 - I g M a n t i b o d i e s d e t e c t e d in th e a c u te a n d c h r o n i c p h a s e .
1000
100
10
1
F ig u r e 3 - I g G a n t i b o d i e s : h i g h le v e is in t h e c h r o n i c p h a s e .
TITER
5
10 15 20 30 40 50 60 90 120 150 180 210 300
DAYS POST INFECTION
O liv e ir a E C , S t e f a n i M M A , L u q u e t i A O , V ê n c io -EF, M o r e i r a M A R , S o u z a C , R e z e n d e J M . T r y p a n o s o m a c r u z i a n d e x p e r i m e n t a l C h a g a s ' d i s e a s e : c h a r a c t e r i z a t i o n o f a s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w it h a s s o c i a t e d d i g e s t i v e a n d c a r d ia c f o r m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3 .
T a b le 1 - I n f l a m a t o r y r e s p o n s e a n d p a r a s i t e m i a .
O r g a n d a y s / i n o c
H e a r t S t r i a t m u s c l e
T o n g u e E s o -p h a g u s
S t o m a c h S m a l l i n t e s t .
C o l o n K i d n e y F a t t i s s u e
L i v e r K u p f f e r
c e l l s
S p l e e n p l a s m a c e l l s
L u n g s L . n o d e p l a s m a c e l l s
4 0 d 1 0 3 + + + P P
+ - + + + P P P
+ + + P P P
+ + - + + + + - -
-1 0 4 + P P P
+ - - - - +
P P P
- - + + + - -
-1 0 5 + + + - - + - + + - + + - - +
-6 0 d 1 0 3 + - - + + + + + + + + + + + - +
1 0 4 + + + + - + + - + + + + - - + + - + +
1 0 5 + + + + - + - +
P P
-P + P P P
- - -
-9 0 d 1 0 3 + + - - - + + + + - + + + - - - + +
1 0 4 + + + - + - + + - + + + + - -
-1 0 5 + + F
+ + + + + + + + + + + + + + - + - - +
-1 8 0 d -1 0 3 + F
+ + + + + + + + + + + + + + + - - -
-1 0 4 + + + + - - + + + + + - - +
1 0 5 + + + + + - + + - - -
-2 1 0 d 1 0 3 + F
+ + - - + + + + + + + + + + + - -
-1 0 4 + + F
+ - - - + + + + + + - + + + + - -
-1 0 5 + + +
-
- - + + + + + + - + + + + + + - --1 0 3 + + - + + + + + + - + + + - -
-3 0 0 d 1 0 4 + + - + + + + + + - + + - -
-1 0 5 + + - + + + + - + + + + - +
4 2 0 d 1 0 3 + + - + + + + + + - + + - -
-I n o c = i n o c u l u m ; L . n o d e = L y m p h n o d e ;
I n f l a m m a t i o n : + s l i g h t ; + + m o d e r a t e ; + + + s e r e v e ; F = f i b r o s i s . P a r a s i t e p s e u d o c y s t s : P s l i g h t ; P P m o d e r a t e ; P P P s e v e r e .
O li v e i r a E C , S t e f a n i M M A , L u q u e t i A O , V ê n c io E F , M o r e i r a M A R , S o u z a C , R e z e n d e J M . T r y p a n o s o m a c r u z i a n d e x p e r i m e n t a l C h a g a s 1 d i s e a s e : c h a r a c t e r i z a t i o n o f a s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w i t h a s s o c i a t e d d i g e s t i v e a n d c a r d i a c f o r m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3 .
i n d i f u s e a s p e c t e i t h e r i n t h e s t r i a t e d a n d h e a r t
m u s c l e s o r i n t h e w a l l s o f t h e h o l l o w o r g a n s . E v e n
w h e r e t h e i n f l a m m a t i o n w a s c o n s i d e r e d s e v e r e it
h a d a n u n e v e n d i s t r i b u t i o n h a v i n g s e g m e n t s w i t h o u t
a n y i n f i l t r a t i o n .
A n i n c r e a s e o f p l a s m a e e l l s w a s o b s e r v e d b o t h
i n t h e l y m p h n o d e s a n d s p l e e n . A n i n f l a m m a t o r y
i n f i ltr a t e r a n g in g f r o m s l i g h t to m a r k e d w a s o b s e r v e d
in t h e f a t t i s s u e o f a l i g r o u p s .
H y p e r p l a s i a o f K u p f f e r c e l l s w i t h v a r ia b l e
i n t e n s i t y w a s o b s e r v e d i n a l i g r o u p s .
I n s p i t e o f e x h a u s t i v e s e a r c h n o p a r a s i te s w e r e
o b s e r v e d in t h e s p l e e n o r a d r e n a l g l a n d s .
T h e i n f l a m m a t o r y i n f i l t r a t e in t h e h e a r t w a s
m o s t ly o b s e r v e d i n t h e e p i c a r d i u m a n d e n d o c a r d i u m
( F i g u r e 5 ) . B e s i d e s t h e i n f i l t r a t e , f o c a l a r e a s o f
n e c r o s i s w e r e o b s e r v e d b o t h i n t h e c a r d i a c a n d
s k e l e t a l m u s c l e . D i s c r e e t f o c i o f f i b r o s i s w e r e
o b s e r v e d i n t h e a n i m a i s s a c r i f i c e d b e t w e e n 1 8 0 a n d
2 1 0 d a y s ( T a b le 1).
D I S C U S S I O N
T h e T. cr u z i s t r a i n s t u d i e d w a s o f lo w v i r u l e n c e e v e n w i t h t h e h i g h e s t i n o c u l u m , s i n c e n o m o r t a l i t y
w a s o b s e r v e d u p t o 3 0 0 d a y s p o s t i n f e c t i o n .
C o n c e m i n g p a r a s i t e m i a a d i r e c t r e l a t i o n s h i p w a s
o b s e r v e d b e t w e e n i n o c u l u m , o n s e t o f p a r a s i t e m i a
a n d i t s p e a k . T h e p r e s e n c e o f b l o o d s t r e a m f o r m s
2 4 h a f t e r i n f e c t i o n c o u l d b e d u e t o n o n - p e n e t r a t i n g
p a r a s i t e s . B r e n e r 2 r e p o r t e d 5 s t r a i n s ( 2 is o l a t e d
f r o m c h a g a s i c p a t i e n t s ) w i t h b l o o d s t r e a m f o r m s
2 4 h p o s t i n f e c t io n u s i n g a i n o c u l u m o f 0 . 1 5 x l 0 6
f o r m s . T h e p a r a s i t e m i a p r o f i l e o b s e r v e d i n th i s
s t u d y w a s s i m i l a r t o p a r a s i t e m i a c u r v e s o b t a i n e d
w i t h o t h e r s t o c k s o f T. cr u z i r e c e n t l y i s o l a t e d f r o m c h r o n i c c h a g a s i c p a t i e n t s 15 16 25 26.
I m m u n o l o g ic a l r e s p o n s e w a s d e m o n s t r a t e d 5
d a y s a f te r i n o c u l a t i o n , b y d e te c ta b le le v e is o f s p e c if ic
I g M a n t i b o d i e s w h i c h i n c r e a s e d p r o g r e s s i v e l y
a f t e r w a r d s u n t i l 3 0 d a y s . I g G a n t i b o d i e s w e r e
p r e s e n t b y d a y 3 0 a f t e r i n f e c t io n i n t h e g r o u p w i t h
t h e h i g h e c t a n d 5 0 d a y s p o s t i n f e c t i o n i n a n i m a i s
w i t h t h e i n t e r m e d i a t e a n d l o w e s t i n o c u la .
A n u n e x p e c t e d r e s u l t w a s o b t a i n e d i n r e la t io n
t o t h e p r e s e n c e o f d e t e c t a b l e I g M in m i c e d u r i n g th e
c h r o n i c p h a s e o f t h e d i s e a s e . B e s id e s t h e f a c t t h a t
th e y w e r e p r e s e n t i n a l i g r o u p s o f m ic e , th e y
p e r s i s t e d t h r o u g h o u t t h e t i m e s t u d i e d . L a n a e t a l 8
u s i n g d o g s r e p o r t e d I g M i n t h e c h r o n i c p h a s e w i t h
d e c r e a s in g t i t e r s f r o m 3 t o 9 m o n t h s a f t e r i n f e c t i o n ;
P e r a l t a e t a l 20 u s i n g m i c e r e p o r t e d o n l y s p e c i f i c I g G
b u t n o t I g M d u r i n g t h e c h r o n i c p h a s e . A c c o r d i n g to
o u r d a t a , h i g h l e v e i s o f I g M w e r e f o u n d l a t e r , i n t h e
c h r o n i c p h a s e ( 1 0 m o n t h s a f t e r i n f e c t i o n ) a n d t i t e r s
d i d n o t d e c r e a s e a f t e r w a r d s . M a g n a n i e t a l 9 r e p o r t e d
I g M , I g A a n d I g G i n t h e c h r o n i c p h a s e o f h u m a n
d is e a s e . T h e s e d a t a w e r e n o t c o n f i r m e d b y s t u d i e s
p e r f o r m e d b y R a s s i e t a l 23 a n d b y C a m a r g o a n d
A m a t o N e t o 4 w h o d i d n o t f i n d I g M in s e r a f r o m
c h r o n i c p a t i e n t s e v e n w i t h p e r s i t e n t p o s i t i v e
x e n o d i a g n o s i s . T h e p r e s e n c e o f I g M i n o u r in f e c t e d
a n i m a i s m a y b e c h a r a c t e r i s t i c o f s o m e s t r a i n s . I r
s u p p o r t o f t h i s v i e w a s i m i l a r f i n d i n g w i t h t h e
e x p e r i m e n t a l i n f e c t i o n o f a n o t h e r s t o c k 5 w a s
o b s e r v e d . T h e i n t e r p r e t a t i o n o f t h e s e d a t a w h i c h
w e r e n o t r e p o r t e d i n m i c e b e f o r e , r e m a i n s t o b e
e l u c i d a te d .
A c l e a r m i o t r o p i s m t o s k e l e t a l a n d s m o o t h
m u s c l e w a s s h o w n b y t h e h i s t o p a t h o l o g i c a l
e x a m i n a ti o n . T h e h e a r t a n d d i g e s t i v e t r a c t h a d t h e
m o s t s e v e r e i n f l a m m a t o r y r e a c t i o n i n d e p e n d e n t l y
o f i n o c u l u m s i z e . E v e n i n j e c t i n g m i c e w i t h a n
i n o c u l u m a h u n d r e d t i m e s h i g h e r w e h a d t h e s a m e
i n f l a m m a t o r y r e a c t i o n . A c c o r d i n g t o p r e v i o u s
r e p o r t s 1 19 26 o u r f í n d i n g s c o n f i r m t h a t i n f l a m m a t o r y
r e a c t i o n a n d f i b r o s i s a r e r e l a t e d t o t h e p a t h o g e n i c i t y
o f s t r a i n s . D e s p i t e t h e i n f l a m m a t i o n n o d i l a t a t i o n
w a s o b s e r v e d i n t h e d i g e s t i v e t u b e a c c o r d i n g t o
m a c r o s c o p i c e x a m i n a t i o n . O k u m u r a e t a l 14 r e p o r t e d
c h r o n ic c h a g a s i c m i c e w i t h m e g a c o l o n a n d P e t a n a
e t a l 17 r e p o r t e d 2 m ic e w i t h m e g a c o l o n i n f e c t e d
w i t h s t o c k s f r o m n a t u r a l r e s e r v o i r s . M a r s d e n e t a l 10
r e p o r t e d g a s t r i c d i l a t a t i o n i n m i c e i n f e c t e d w i t h
s t o c k s f r o m p a t i e n t s w i t h m e g a e s o p h a g u s . A l s o t h e
o r i g i n o f t h e s t r a i n , f r o m n a t u r a l l y i n f e c t e d a n i m a i s
o r h u m a n s , m a y i n f l u e n c e t h e p a r a s i t e t r o p i s m a n d
p a t h o g e n i c i t y o f e x p e r i m e n t a l a n i m a i s .
T h i s s t o c k m a y b e c l a s s i f i e d a s b e l o n g i n g to
t y p e I I a c c o r d i n g t o A n d r a d e ’s p a r a m e t e r s 1 o f s t r a i n
c l a s s i f í c a t i o n b e c a u s e o f t h e l o w v i r u l e n c e a n d
m o r t a l i t y w i t h h e a r t t r o p i s m . O n t h e o t h e r h a n d ,
m o r t a l i t y p a t t e m o f t y p e I I s t r a i n s is u s u a l l y h i g h e r
t h a n t h e s t o c k h e r e d e s c r i b e d , w i t h d e a t h s w i t h i n
th e f i r s t m o n t h a f t e r i n f e c t i o n ; h e n c e , b y m o r t a l i t y
c r i t e r i a , t h i s s t o c k c o u l d b e c l a s s i f i e d a s t y p e I I I .
A n o t h e r f a c t t h a t f a v o u r s t h i s s t o c k a s t y p e I I I is t h e
O liv e ir a E C , S t e f a n i M M A , L u q u e l i A O , V ê n c io E F , M o r e i r a M A R , S o u z a C , R e z e n d e J M . T r y p a n o s o m a c r u z i a n d e x p e r i m e n t a l C h a g a s ' d i s e a s e : c h a r a c t e r i z a t i o n o f a s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w ith a s s o c i a t e d d i g e s t i v e a n d c a r d i a c f o r m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3 .
F ig u r e 4 - P h o t o m i c r o g r a p h s o f s m a l l (A ) a n d la r g e (B ) in te s t in e in lh e c h r o n i c p h a s e : s e v e r e l y m p h o - h i s ti o c y li c i n f il tr a te m a in ly in m u s c l e a n d s e r o s a l a y e r s (H E ) (lO O x).
F ig u r e 5 - P h o t o m i c r o g r a p h s o f h e a r t (A a n d B ) in th e c h r o n i c p h a s e : e n d o c a r d i c a n d m y o c a r d i a l t y m p h o - h i s li o c y ti c i n f il tr a te f o c i ( H E ) (2 0 0 x ) .
F i g u r e 6 - P h o t o m i c r o g r a p h o f i n t e s t i n e w a l l : i n t r i n s i c n e r v o u s s y s t e m c e l l s ( a r r o w ) ( H E ) ( 4 0 0 x ) .
n o t d e s c r i b e d in t y p e I I s t r a i n s .
A l a r g e r g r o u p o f s t o c k s i s o l a t e d f r o m t h e s a m e
r e g io n a n d f r o m p a t i e n t s w i t h w e l l c h a r a c te r i z e d
c l i n i c a i f o r m s m a y p r o v i d e f u r t h e r i n f o r m a t i o n in
r e l a t i o n w i t h t h e p a t h o g e n e s i s o f C h a g a s ’ d i s e a s e .
R E S U M O
U m n o v o e s t o q u e d e T r y p a n o s o m a c r u z i is o la d o d e p a c i e n t e c h a g á s i c o c r ô n i c o , c o m a f o r m a d i g e s t i v a e c a r d i a c a d a d o e n ç a , f o i c a r a c t e r i z a d o a t r a v é s d e in fe c ç ã o e x p e r i m e n t a l em c a m u n d o n g o s is o g ê n i c o s A / S n s u s c e tív e is à in fe c ç ã o c h a g á s ic a . A s c u r v a s d e p a r a s ite m ia m o s tr a r a m p i c o s d e a t é 1 , 7 x l ( f i p a r a s i t a s / m l n ã o s e o b s e r v a n d o
O l i v e i r a E C , S t e f a n i M M A , L u q u e t i A O , V é n c io E F , M o r e i r a M A R , S o u z a C , R e z e n d e J M . T r y p a n o s o m a c r u z i a n d e x p e r i m e n t a l C h a g a s ' d i s e a s e : c h a r a c t e r i z a t i o n o f a s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w i t h a s s o c i a t e d d i g e s t i v e a n d c a r d i a c f o r m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3 .
m o r t a l i d a d e a t é 3 0 0 d i a s p ó s in fe c ç ã o . A n t i c o r p o s d a c l a s s e I g M f o r a m e n c o n t r a d o s n a f a s e a g u d a a t é 4 0 d ia s e t a m b é m n a f a s e c r ô n i c a e I g G f o i d e t e c t a d a n a s f a s e s a g u d a e c r ô n i c a . O e x a m e h i s t o p a t o l ó g i c o m o s tr o u m i o t r o p i s m o p a r a m ú s c u l o lis o d o tu b o d i g e s t i v o e c a r d í a c o .
P a l a v r a s - c h a v e s : C e p a d e T r y p a n o s o m a c r u z i . D o e n ç a d e C h a g a s . I n f e c ç ã o e x p e r i m e n t a l. S o r o lo g ia . H is t o p a to l o g ia .
R E F E R E N C E S
1 . A n d r a d e S G . C a r a c t e r i z a ç ã o d e c e p a s d o T r y p a n o s o m a c r u z i i s o l a d a s n o r e c ô n c a v o b a i a n o . R e v i s t a d e P a t o l o g i a T r o p i c a l 3 : 6 5 - 1 2 1 , 1 9 7 4 . 2 . B r e n e r Z . C o m p a r a t i v e s t u d i e s o f d i f f e r e n t s t r a i n s o f
T r y p a n o s o m a c r u z i. A n n a l s o f T r o p i c a l M e d i c i n e a n d P a r a s i t o l o g y 5 9 : 1 9 - 2 6 , 1 9 6 4 .
3 . B r e n e r Z . R e c e n t d e v e l o p m e n t s in t h e f i e l d o f C h a g a s ’ d i s e a s e , B u l l e t i n o f t h e W o r l d H e a l t h O r g a n i z a t i o n 6 0 : 4 6 3 - 4 7 3 , 1 9 8 2 .
4 . C a m a r g o M E , A m a t o N e t o A . A n ú - T r y p a n o s o m a c r u z i I g M a n t i b o d i e s a s s e r o l o g i c a l e v i d e n c e o f r e c e n t i n f e c t i o n . R e v i s t a d o I n s t i t u t o d e M e d i c i n a T r o p i c a l d e S ã o P a u l o 1 6 : 2 0 0 - 2 0 2 , 1 9 7 4 .
5 . C a s t r o A M , O l i v e i r a E C , S t e f a n i M M A , R e z e n d e J M , L u q u e t t i A O . R e l a c i ó n e n t r e n ü m e r o d e p a r á s i t o s y r e s p u e s t a i n m u n e h u m o r a l e n r a t o n e s i n f e c t a d o s c o n d o s e s t o q u e s a i s l a d o s d e p a c i e n t e s c h a g á s i c o s . X C o n g r e s o L a t i n o a m e r i c a n o d e P a r a s i t o l o g i a . M o n t e v i d e o , n o v e m b r o , 1 9 9 1 .
6 . C a s t r o C , R e z e n d e J M , C a m a r g o M , C e r i s o l a A . P r a t a A , M a c e d o V . E s o f a g o p a t i a c h a g á s i c a n o m u n i c í p i o d e M a m b a í . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 7 ( s u p l ) : 2 2 , 1 9 8 4 . 7 . K i p n i s T L , M i n o p r i o P M , L u q u e t t i A O , R a s s i A ,
D i a s W D . E s t u d o i m u n o b i o l ó g i c o d e e s t o q u e s d e T r y p a n o s o m a c r u z i i s o l a d o s d e p a c i e n t e s n a f a s e a g u d a d a d o e n ç a d e C h a g a s . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 6 : 1 7 5 - 1 8 3 , 1 9 8 3 . 8 . L a n a M , V i e i r a L M , L e m o s E M , T a f u r i W L , C h i a r i
E , C o s t a C A . P e r f i l d e I g G e I g M e m c ã e s e x p e r i m e n t a l m e n t e i n f e c t a d o s p o r T r y p a n o s o m a c r u z i d u r a n t e a f a s e a g u d a e c r ô n i c a d a i n f e c ç ã o . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 2 ( s u p l . I I ) : 7 8 , 1 9 8 9 .
9 . M a g n a n i M A C , F e r r i o l l i F i l h o F , S i q u e i r a A F . I m u n o g l o b u l i n a s ( I g A , I g G e I g M ) e m s o r o s d e c h a g á s i c o s c r ô n i c o s v e r i f i c a d o s p o r r e a ç õ e s d e i m u n o f l u o r e s c ê n c i a i n d i r e t a . R e v i s t a d o I n s t i t u t o d e M e d i c '- i ' T r o p i c a l d e S ã o P a u l o 1 5 : 7 2 - 7 5 , 1 9 7 3 . 1 0 . M a r s d e n P D , A l v a r e n g a N J , S o a r e s V A , G a m a M P .
A t t e m p t s t o p r o d u c e m e g a s y n d r o m e in m i c e u s i n g
s t o c k s o f T r y p a n o s o m a c r u z i w i t h m e g a e s o p h a g u s i n m a n . T r a n s a c t i o n s o f t h e R o y a l S o c i e t y o f T r o p i c a l M e d i c i n e a n d H y g i e n e 7 3 : 6 5 1 - 6 5 5 , 1 9 7 9 .
1 1 . M i l e s M A . T r a n s m i s s i o n c y c l e s a n d t h e h e t e r o g e n e i t y o f T r y p a n o s o m a c r u z i ■ I n : L u m s d e n W H R , E v a n s D A ( e d ) B i o l o g y o f t h e K i n e t o p l a s t i d a . A c a d e m i c P r e s s , L o n d o n , v o l . 2 p . 1 1 7 - 1 9 6 , 1 9 7 9 .
1 2 . M i l e s M A , C i b u l s k i s R E . Z y m o d e m e c h a r a c t e r i z a t i o n o f T r y p a n o s o m a c r u z i. P a r a s i t o l o g y T o d a y 2 : 9 4 - 9 7 , 1 9 8 6 .
1 3 . N u s s e n s w e i g V , D e a n e L M , K l o e t z e l J . D i v e r s i d a d e n a c o n s t i t u i ç ã o a n t i g ê n i c a d e a m o s t r a s d e T r y p a n o s o m a c r u z i i s o l a d a s d o h o m e m e d e g a m b á s . R e v i s t a d o I n s t i t u t o d e M e d i c i n a T r o p i c a l d e S ã o P a u l o 4 : 4 0 9 - 9 1 0 , 1 9 6 2 .
1 4 . O k u m u r a M , F o n s e c a L C , C o r r ê a N e t o A . A p a t o l o g i a d a d o e n ç a d e C h a g a s e x p e r i m e n t a l e m c a m u n d o n g o s b r a n c o s . R e v i s t a d o H o s p i t a l d a s C l í n i c a s 1 8 : 7 3 - 7 8 , 1 9 6 3 .
1 5 . O l i v e i r a E C , V ê n c i o E F , A r a ú j o M M , S i l v a I G , R e z e n d e J M , L u q u e t t i A O . C u r v a d e p a r a s i t e m i a d e e s t o q u e d e T r y p a n o s o m a c r u z i p r o v e n i e n t e d e p a c i e n t e c o m a f a s e c r ô n i c a d a D o e n ç a d e C h a g a s . I n : R e s u m o s d a V R e u n i ã o A n u a l d e P e s q u i s a A p l i c a d a e m D o e n ç a d e C h a g a s , A r a x á p . 6 9 , 1 9 8 8 . 1 6 . O l i v e i r a E C , V ê n c i o E F , A r a ú j o J r U G , B e c h e p e c h e
M A F , S i l v a I G , V a z M G M , R e z e n d e J M , L u q u e t t i A O . C o m p o r t a m e n t o e m a n i m a i s d e e s t o q u e d e T r y p a n o s o m a c r u z i i s o l a d o d e p a c i e n t e n a f o r m a d i g e s t i v a d a d o e n ç a d e C h a g a s . I n : R e s u m o s d o X X V I C o n g r e s s o d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l , N a t a l p . 1 4 9 , 1 9 9 0 .
1 7 . P e t a n a W B , C o u r a J R . E x p e r i m e n t a l s t u d i e s o n T r y p a n o s o m a ( S c h iz o tr y p a n u m ) c r u z i s t r a i n s i s o l a t e d f r o m m a n , f r o m a n i m a i s a n d f r o m t r i a t o m i n e b u g s in B r a z i l . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 8 : 3 1 5 - 3 2 3 , 1 9 7 4 .
1 8 . P o n s t a m M , M a c D a n i e l J P , D v o r a k J A . T r y p a n o s o m a cru zi'. c o n s t a n c y o f c l o n e p a t h o g e n i c i t y f o r i n b r e d m i c e d u r i n g l o n g - t e r m in v i t r o m a i n t e n a n c e . T r a n s a c t i o n s o f t h e R o y a l S o c i e t y o f T r o p i c a l M e d i c i n e a n d H y g i e n e 8 0 : 6 5 9 - 6 6 3 , 1 9 8 6 . 1 9 . P o n s t a n M , M a c D a n i e l J P , D v o r a k J A . C o m p a r a t i v e
s t u d i e s o f t h e i n f e c t i o n o f L e w i s r a t s w i t h f o u r T r y p a n o s o m a c r u z i c l o n e s . T r a n s a c t i o n s o f t h e R o y a l S o c i e t y o f T r o p i c a l M e d i c i n e a n d H y g i e n e 8 1 : 4 1 5 - 4 1 9 , 1 9 8 7 .
2 0 . P e r a l t a J M , F i l a r d i L , L o u r d e s M A L , T o r r e s S T . T r y p a n o s o m a c r u z i a n t i b o d i e s in m i c e i n f e c t e d w i t h d i f f e r e n t s t r a i n s o f T. c r u z i . J o u r n a l o f P a r a s i t o l o g y 6 6 : 3 4 2 - 3 4 4 , 1 9 8 0 .
O liv e ira E C , S t e f a n i M M A , L u q u e t i A O , V ê n c io E F , M o r e i r a M A R , S o u z a C , R e z e n d e J M . T r y p a n o s o m a c r u z i a n d e x p e r i m e n t a l C h a g a s ' d i s e a s e : c h a r a c t e r i z a t i o n o f a s t o c k i s o l a t e d f r o m a p a t i e n t w ith a s s o c i a t e d d i g e s t i v e a n d c a r d ia c f o r m . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 6 : 2 5 - 3 3 , j a n - m a r , 1 9 9 3 .
1 9 7 6 .
2 2 . P r a t a A . S i g n i f i c a n c e o f T r y p a n o s o m a c r u z i d i f f e r e n t i a t i o n a n d s e l e c t i o n , r e l a t i o n s h i p w i t h c l i n i c a i a n d e p i d e m i o l o g i c a l v a r i e t i e s . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 8 ( s u p l ) : 9 - 1 6 , 1 9 8 5 . 2 3 . R a s s i A , A m a t o N e t o V , L e m o s Z P , A l m e i d a J W R .
T e n t a t i v a d e c o r r e l a ç ã o e n t r e p a r a s i t e m i a , a v a l i a d a p o r x e n o d i a g n ó s t i c o , e p e s q u i s a d e a n t i c o r p o s I g M a n t i t r i p a n o s o m a n o s o r o d e p a c i e n t e s n a f a s e c r ô n i c a d a d o e n ç a d e C h a g a s . R e v i s t a G o i a n a d e M e d i c i n a 2 4 : 6 7 - 7 5 , 1 9 7 8 .
2 4 . R e z e n d e J M . C h a g a s i c m e g a s y n d r o m e s a n d r e g i o n a l d i f f e r e n c e s . In : N e w A p p r o a c h e s in A m e r i c a n T r y p a n o s o m i a s i s R e s e a r c h . P a n A m e r i c a n H e a l t h
O r g a n i z a t i o n S c i e n t i f i c P u b l i c a t i o n 3 1 8 . W a s h i n g t o n p . 1 9 5 - 2 0 5 , 1 9 7 6 .
2 5 . S c h l e m p e r J r B R . C a r a c t e r i z a ç ã o d e c e p a s d e T r y p a n o s o m a c r u z i i s o l a d a s d e p a c i e n t e s c o m d i f e r e n t e s f o r m a s c l í n i c a s d a d o e n ç a d e C h a g a s . T e s e d e d o u t o r a d o , U n i v e r s i d a d e F e d e r a l d o R io d e J a n e i r o , R i o d e J a n e i r o , 1 9 8 2 .
2 6 . S c h l e m p e r J r B R , A v i l a C M , C o u r a J R , B r e n e r Z . C o u r s e o f i n f e c t i o n a n d h i s t g p a t h o l o g i c a l l e s i o n s in m i c e i n f e c t e d w i t h s e v e n t e e n T r y p a n o s o m a c r u z i s t r a i n s i s o l a t e d f r o m c h r o n i c p a t i e n t s . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 1 6 : 2 3 - 3 0 , 1 9 8 3 .
