RESUMO DE TESE
USO D E ANTÍGENO IMOBILIZADO
THE USE OF ANTIGEN
EM DACRON, SOB A FORMA
IMMOBILIZED ON DACRON PLATES
AZIDA, PARA UTILIZAÇÃO EM
FOR ENZYME IMMUNOASSAY
ENSAIO IMUNOENZIMÁTICO
Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 26(1):63, jan-m ar, 1993
O d a c ro n (p o lie tile n o te re fta la to ) fo i p ro p o sto c o m o m a t r i z n o e n s a i o i m u n o e n z i m á t i c o m o d if ic a d o , d o t- E L I S A , c o m o a lte r n a tiv a à n itro c e lu lo s e q u e é a m a is u tiliz a d a . P la c a s de d a c ro n fo r a m a tiv a d a s m e d ia n te h id ra z in ó lis e p a rc ia l e c o n v e rs ã o d o s g ru p a m e n to s h id ra z id a s e m a z id a s p a ra p o s te rio r fix aç ão co v a le n te de a n tíg e n o s à su p e rfíc ie d e ssa s p la c a s, a tra v é s d esses ú ltim o s g ru p a m e n to s. L a v a g e n s p re c o n iz a d a s p o r C R O O K n ã o fo ra m ca pa ze s d e re m o v e r o s antfgenos fix ad o s co v ale n tem en te. A p ro te ín a F 1A d e
Yersinia
pestis
fo i u s a d a c o m o a n tíg e n o e a titu la ç ã o des o ro s d e c o e lh o s im u n iz a d o s c o n tra essa p ro te ín a fo i re a liz a d a , te n d o co m o c o n tro le o so ro d e c o e l h o s n o r m a i s . O s r e s u l t a d o s o b t i d o s d e m o n s tra ra m n ã o h a v e r d ife re n ç a sig n ific a tiv a e n tre o s te ste s im u n o e n z im á tic o s , u tiliz a n d o com o m a triz : o d a c ro n e a n itro c e lu lo s e , e n tre ta n to , h o u v e d ife re n ç a sig n ific a tiv a e n tre o te ste de h e m a g lu tin a ç ã o p a s s iv a e o te ste im u n o e n z im á tic o u t i l i z a n d o c o m o m a t r i z e s : o d a c r o n e a n itro c e lu lo s e . A o tim iz a ç ã o d esse m é to d o foi in v e s tig a d a , m e d ia n te a a n á lis e d e d ife re n te s c o n d iç õ e s: te m p o d e h id ra z in ó lis e d o d a c ro n , c o n c e n tra ç ã o d o a n tíg e n o , su b stâ n c ia b lo q u e a d o ra (le ite in s ta n tâ n e o d e sn a ta d o n a co n c e n tra ç ã o d e 3 0 % e c o m te m p o d e in c u b a ç ã o d e I5 m in ) e d ilu iç ã o d o c o n ju g a d o a n ti-Ig G d e c o e lh o c o m p e r o x id a s e . A n itr o c e lu lo s e m o s tro u -s e m ais se n sív e l q u e o d a c ro n , p o is d e te c to u m en o re s q u a n tid a d e s d e a n tíg e n o F 1 A . A esp e c ific id a d e foi c o n s id e ra d a s e m e lh a n te n o s d o is s u p o rte s. A re p ro d u tib ilid a d e fo i s im ila r e m a m b o s o s su p o rte s . O d a c ro n c o m o a n tíg e n o fix a d o foi efic ien te q u a n d o a rm a z e n a d o a 4°C p o r 9 0 d ia s, en q u a n to a n itr o c e lu lo s e c o m o a n tíg e n o ta m b é m fix a d o m o s tro u -s e v iá v e l a 4 °C , 2 8 °C e -2 0 °C p o r 9 0 d ias. A re u tiliz a ç ã o d o d a c ro n só fo i c o n se g u id a qu an d o o te s te im u n o e n z im á tic o fo i re v e la d o co m 4 -c lo ro - 1 -n a fto l.
D a c ro n (p o ly e th y le n e th e re p h th a la te ) is p ro p o se d
as a m atrix fo r d o t-E L IS A p ro c ed u re s, as an a lte m a tiv e
to n itro c e llu lo s e . P la te s o f d a c ro n w e re p a rtia lly
h y d ra z in o ly se d a n d h y d ra z id e g ro u p s in tro d u c e d
w e re c o n v e rte d to a z id e g ro u p s . A n tig e n w as
c o v a le n tly lin k e d o n to th e p la te s th ro u g h th e se az id e
g r o u p s . T h e d e r i v a t i v e d a c r o n - a n t i g e n w a s
ex h a u stiv e ly w a sh e d a c c o rd in g to C R O O K an d
a n tig e n w a s still fix e d o n to th e p la te s. P ro te in F I A
p u rifie d fro m
Yersinia pestis
w a s u se d as a m o d el.T itra tio n o f sera o f im m u n iz e d a n d n o n im m u n iz e d
ra b b its a g a in st th is p ro te in w a s c a rrie d o u t by
e m p lo y in g d o t-E L IS A m e th o d . N o s ig n ific a n t
d iffe re n c e w a s o b se rv e d u sin g d a c ro n -a n tig e n an d
n itro c e llu lo s e -a n tig e n p re p a ra tio n s . H o w e v e r, b o th
p ro c e d u re s sh o w e d to h a v e a s ig n ific a n t b e tte r
p e r f o m a n c e c o m p a r i n g w i t h t h e p a s s i v e
h e m a g lu tin a tio n m e th o d . T h e s p e c if ic ity a n d
re p ro d u c ib ility o f d o t-E L IS A assa y u s in g b o th
p re p a ra tio n s sho w ed a sim ila r b e h a v io u r. D o t-E L IS A
p ro c e d u re u s in g d a c ro n -a n tig e n d e r iv a tiv e w as
o p tim iz e d b y s tu d y in g se v e ra l c o n d itio n s: tim e o f
h y d ra z in o ly s is ; a n tig e n c o n c e n tra tio n ; b lo c k in g
su b stan ce a n d ra b b it a n ti-Ig G p e ro x id a s e co n ju g a te d
d ilu tio n . N itro c e llu lo s e p re p a ra tio n w a s sta b le a t
4 °C , 2 8 °C a n d -2 0 °C fo r 9 0 d a y s , w h e re a s d a c ro n -
a n tig e n d e riv a tiv e w a s s ta b le o n ly w h e n sto re d at
4°C . D a c ro n -a n tig e n d e riv a tiv e w a s re u se d w h e n th e
sp o t d e v e lo p in g w a s p ro c e e d e d u sin g 4 - c h lo r o - l-
n a p h to l as su b strate.
Silvia Maria Lucena Montenegro
T e s e a p re s e n ta d a a o D e p a rta m e n to d e B io q u ím ic a da U n iv e rs id a d e F e d e ra l d o P e rn a m b u c o p a ra
o b te n ç ã o d o T ítu lo d e M e stre R e c ife , P e rn a m b u c o , B ra sil, 1991
R e c e b id o p a r a p u b lic a ç ã o e m 0 4 /0 1 /9 3 .
