Rev. Bras. Anestesiol. vol.67 número2

(1)

REVISTA

BRASILEIRA

DE

ANESTESIOLOGIA

PublicaçãoOficialdaSociedadeBrasileiradeAnestesiologia

www.sba.com.br

ARTIGO

CIENTÍFICO

Efeito

de

dexmedetomidina

sobre

lesão

pulmonar

aguda

em

modelo

experimental

de

isquemia-reperfusão

Ömer

Burak

Küc

¸ükebe

a

_,

_Deniz

_Özzeybek

b

_,

_Ruslan

_Abdullayev

a,∗

,

Adil

Ustao˘

glu

c

,

Is

¸ıl

Tekmen

d

_e

_Tuncay

_Küme

e

a_Adıyaman_University_Research_and_Educational_Hospital,_Department_of_{Anesthesiology}_and_Reanimation,_Adıyaman,_Turquia b_Dokuz_Eylül_University_Medical_Faculty,_Department_of_{Anesthesiology}_and_{Reanimation, ˙Izmir,}_Turquia

c_Zonguldak_Atatürk_Hospital,_Department_of_{Anesthesiology}_and_Reanimation,_Zonguldak,_Turquia d_Dokuz_Eylül_University_Medical_Faculty,_Department_of_Histology_and_{Embryology, ˙Izmir,}_Turquia e_Dokuz_Eylül_University_Medical_Faculty,_Department_of_Medical_{Biochemistry, ˙Izmir,}_Turquia

Recebidoem1demarçode2015;aceitoem17deagostode2015 DisponívelnaInternetem28desetembrode2016

PALAVRAS-CHAVE

Experimental; Dexmedetomidina; Lesãodereperfusão; Lesãopulmonar aguda

Resumo

Objetivo: Alesãodeisquemia-reperfusãoéumadasconsequênciasdaaplicac¸ãodotorniquete

emcirurgiasdeextremidades.Oobjetivodoestudofoideterminaroefeitodedexmedetomidina

emlesãopulmonaragudaapósmodeloexperimentaldeisquemia-reperfusãoemextremidade

inferiorderatos.

Métodos: VinteeoitoratosalbinosWistarforamrecrutadosapósaprovac¸ãodoComitêdeÉtica

ealocadosemquatrogrupos,cadaumcomseteindivíduos.OGrupo1(Sham)recebeuapenas

anestesia.OGrupo2(IR)foisubmetidoa3horasdeisquemiae3horasdereperfusãocomo

usodetorniqueteemextremidadeinferiorapósaaplicac¸ãodaanestesia.Osgrupos3(D-50)

e4(D-100)foramsubmetidosaosmesmosprocedimentosdoGrupo2,excetoporreceberem

50 e 100mg.kg−1 _de_{dexmedetomidina,} _{respectivamente,} _por_via_{intraperitoneal} _uma _hora

antesdaliberac¸ãodotorniquete.AmostrasdesangueforamcoletadasparaanálisedeTNF-␣

eInterleucina-6(IL-6).Amostrasdetecidopulmonarforamcoletadasparaanálisehistológica.

Resultados: Nãohouvediferenc¸asignificativaquantoaosvaloressanguíneosdeTNF-␣eIL-6

entre osgrupos, enquanto osescores delesão em tecidos pulmonaresrevelaramdiferenc¸a

significativa.OsescoreshistológicosobtidosnoGrupo2foramsignificativamentemaioresdo

que osdos grupos1, 3e 4,com valores-pde 0,001para cadacomparac¸ão.Alémdisso, os

escoresdoGrupo1foramsignificativamentemenoresdoqueosdosgrupos3e4,comvalores-p

de0,001e0,011,respectivamente.Nãohouvediferenc¸asignificativaentreosgrupos3e4.

∗_Autor_para_{correspondência.}

E-mail:ruslanjnr@hotmail.com(R.Abdullayev). http://dx.doi.org/10.1016/j.bjan.2016.09.004

(2)

Conclusão:Dexmedetomidinamostroueficácianareduc¸ãodelesãoemtecidopulmonar

indu-zidaporisquemia-reperfusãoexperimentalemratos,ocasionadaporaplicac¸ãodetorniquete

emextremidade.

artigoOpen Accesssobumalicenc¸aCCBY-NC-ND(

http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

KEYWORDS

Experimental; Dexmedetomidine; Reperfusioninjury; Acutelunginjury

Effectofdexmedetomidineonacutelunginjuryinexperimental ischemia---reperfusionmodel

Abstract

Purpose:Ischemia-reperfusioninjuryisoneoftheconsequencesoftourniquetapplicationfor

extremitysurgery.Theaimofthestudywastoestablishtheeffectofdexmedetomidineonthe

acutelunginjuryfollowinglowerextremityexperimentalischemia---reperfusionmodelinrats.

Methods:Twenty-eightWistar-AlbinobreedratswererecruitedafterEthicsCommittee

appro-valandallocatedinto4groups,eachwith7subjects.Group1(SHAM)receivedonlyanesthesia.

Group2(IR)hadexperienced3hofischemiaand3hofreperfusionusingleftlowerextremity

tourniquetafteranesthesiaapplication.Groups3(D-50)and4(D-100)hadundergonethesame

proceduresasintheGroup2,exceptforreceiving50and100mg.kg−1_,_{respectively,}

dexme-detomidineintraperitoneally1hbeforethetourniquetrelease.Bloodsampleswereobtained

fortheanalysisoftumornecrosingfactor-␣andinterleukin-6.Pulmonarytissuesampleswere

obtainedforhistologicalanalysis.

Results:Nosignificantdifferenceregardingbloodtumornecrosingfactor-␣andinterleukin-6

valueswasfoundamongthegroups,whereaspulmonarytissueinjuryscoresrevealedsignificant

difference.HistologicalscoresobtainedfromtheGroup2weresignificantlyhigherfromthose

intheGroups1,3and4withp-values0.001foreachcomparison.Moreover,Group1scores

werefoundtobesignificantlylowerthanthoseintheGroups3and4withp-values0.001and

0.011,respectively.NosignificantdifferencewasobservedbetweentheGroups3and4.

Conclusion:Dexmedetomidine is effective in reduction of the experimental

ischemia---reperfusioninducedpulmonarytissueinjuryinrats,formedbyextremitytourniquet

application.

openaccessarticleundertheCCBY-NC-NDlicense(

http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).

Introduc

¸ão

Asuspensãodofluxo sanguíneo,istoé, isquemiatecidual, e a reperfusão após um período de tempo são os princi-paismecanismosfisiopatológicosresponsáveis porlesionar órgãos após alguns procedimentos médicos, como trans-plantedeórgãos,isquemiacerebral,acidentevascular cere-bral, infarto do miocárdio, tromboembolismo, circulac¸ão extracorpórea e cirurgias vasculares, grande traumatismo e choque hemorrágico, bem como procedimentos cirúrgi-coscom o usodetorniquete.1,2 _A_lesão _isquêmica _resulta

principalmente da necrosecelular devido à suspensão de oxigênio. Ofornecimento de oxigênio durante a isquemia não é suficiente para satisfazer as necessidades metabó-licas das células e essa condic¸ão resulta na ativac¸ão do metabolismoanaeróbico.3_Quando_o_fluxo_sanguíneo_retorna

novamenteaotecido,istoé,quandoareperfusãoteminício, oretornodofluxoparadoxalmenteaumentaodanoaos teci-doslocais,juntamentecomarespostainflamatória,oque resultaemdanosaórgãosdistantes.2,3_Muitos_agentes

infla-matóriosdemonstraram ser responsáveispor esses danos, entreelesalesãodeisquemia-reperfusão(LIR).2

Ascitocinasforamresponsabilizadaspordanosaórgãos distantesdevidoàLIR.4_Relatou-se_que _os_níveis

plasmáti-cos dofator-␣ denecrosetumoral (TNF-␣),interleucina-1 (IL-1) e IL-6estavam elevados em tecido renal e pulmo-nar após isquemia em membroposterior.5 _Os_mediadores

liberadosapósisquemia-reperfusão(IR)resultamemlesões orgânicaslocais edistantespormeioderadicaislivres de oxigênioe leucócitos.6,7_Efeitos _{imunorreguladores}

negati-vos denoradrenalinaforamdemonstradosnaformac¸ãode mediadoresdeorigemmonocítica/macrofágica(TNF-␣, IL-1,IL-6)eessesefeitosestavamligadosaadrenorreceptores ␤e␣2.8

Dexmedetomidinaéumagonista␣2-adrenérgicopotente eseletivo,od-isômerofarmacologicamenteativoda mede-tomidina, que é metabolizado no fígado. Seu uso foi aprovado para sedac¸ão em unidade de terapia intensiva e tem propriedades sedativas e analgésicas.9,10 _Há

pou-cosestudosnaliteraturasobreosefeitosanti-inflamatórios dedexmedetomidina.11---16_Yagmurdur_et_al.14_demonstraram

(3)

tenhasidodemonstrado quedexmedetomidinatemalguns efeitosprotetoresem LIRlocalizada,nãoencontramosum estudodeseusefeitossobrearespostainflamatória sistê-micaedanosemórgãosdistantes.

Nossoobjetivofoiavaliarosefeitosdeduasdoses dife-rentesdedexmedetomidinasobrealesãopulmonaraguda apósmodeloexperimentaldeisquemia-reperfusãoem mem-bros inferiores de ratos. A hipótese teve como base os possíveisefeitosprotetoresdedexmedetomidinaelevouem considerac¸ãoseusefeitosanti-inflamatórios.

Métodos

EsteestudofoiconduzidonoLaboratóriodeExperimentac¸ão Animal da Faculdade de Medicina da Universidade Dokuz Eylul entre 01/01/2009 e 31/05/2009, após obter a aprovac¸ão doComitêdeÉticapara EstudosExperimentais emAnimaisdaUniversidadeDokuzEylul,Esmirna,Turquia (24/11/2008, n◦ _134, _Presidente _Prof. _M. _Olguner). _Vinte

eoitoratos, fêmeasadultas,daraçaWistar-Albino,entre 250-340g, foramusados para o estudo. Osanimais foram alimentadoscomraçãopadrãoeáguaemantidosemciclos de12horasdeclaro/escuroparaadaptaçãoantesdoinício doestudo.Temperaturaeumidadetambémforam padroni-zadas.

Osratosforammantidosemjejumpor12hantesdo pro-cedimentocirúrgico, receberamsomente água. Cadarato foi pesado antes da experiência e as doses de dexmede-tomidina foramcalculadas.A distribuição dos animaisem quatro grupos foi feita de modo aleatório com o método deenvelopelacrado:Grupo1(Sham,n=7)recebeuapenas anestesia,comobtençãodeamostradesanguenaprimeira horade reperfusãoe amostras desangue e tecidono fim dareperfusão;Grupo 2s (IR, n=7) foisubmetidoa 3h de isquemiae3hdereperfusãoeusoutorniqueteemmembro posterioresquerdoapósaaplicaçãodaanestesia.Amostras desangueforamcolhidasnaprimeirahoradereperfusãoe amostrasde sanguee tecido nofimdareperfusão;Grupo 3(D-50,n=7)foisubmetidoaosmesmosprocedimentosdo Grupo2,excetoporreceber50␮g.kg---1_de_{dexmedetomidina} (Precedex, Abbott Laboratories Ltd., North Chicago ABD, 100␮g.mL---1₎_por_via_{intraperitoneal}₁_h_antes_da_liberac_¸ão do torniquete; Grupo 4 (D-100, n=7) foi submetido aos mesmos procedimentos do Grupo 2, exceto por receber 100␮g.kg---1_de_{dexmedetomidina}_por_via_{intraperitoneal}₁_h antes da libertação do torniquete. Novamente, amostras desangueforamobtidasnaprimeirahoradereperfusãoe amostrasdesanguee tecidonofim dareperfusãoparaos grupos3e4.

Aanestesiafoiadministradaporviaintraperitonealcom mistura de50mg.kg−1_de_cetamina _(Pfizer_Pharma_GmbH, Alemanha) e 10mg.kg−1 _de _cloridrato _de _xilazina (Alfa-zine,2%,Egevet).Aisquemiafoifeitacomgarroteelástico (1cmdelargurae30cmdecomprimento)aplicadoàregião inguinal do membro posterior esquerdo. O torniquete foi liberadopara estabelecerareperfusão após operíodo de tempodeterminado.Atemperatura ambientefoimantida estável,amesadeoperac¸ãofoiaquecidaparaprotegeros ratosdehipotermiae atemperaturacorporal dosanimais foimantidaentre36,8◦_C_e_37,5◦_C._Os_ratos_foram

hidrata-doscom3mL.kg---1_.h---1_de_cloreto_de_sódio_isotônico,_por_via

subcutânea,durantetodooprocedimentodeIRparaevitara desidratação.Osanimaisforamsacrificadosapósaobtenção dasamostrasdesangueetecido.Aduraçãodoprocedimento foiigualemtodososgrupos.

No fimda primeira hora dastrês horas de reperfusão, 1,5mL de sangue foi coletado da veia da cauda dos ani-masparaanálisedeTNF-␣eIL-6,colocadoemtuboestéril comácidoetilenodiaminotetracético(EDTA)ecentrifugado por10min a umavelocidade de1.200rpm.O plasma das amostrasdesanguefoiseparadoecolocadoemtubos Eppen-dorf,congeladoemantidoa70◦_C_até_o_dia_da_análise._Os

ratosreceberamcloretodesódioisotônicoporvia intrape-ritoneal,emquantidadeigualàextraídaparaamostragem. No fim da reperfusão, o tórax foi aberto por abordagem subdiafragmática.Aamostrade sanguepara TNF-␣ e IL-6 foi obtida em volume de 2mL diretamente docoração e acondicionadadamesmaformamencionadaacima.Nofim doprocedimento,5mLdeformola10%foramlentamente aplicadosatravésdoápexcardíacocomumadaagulhade calibre 20G e o coração e o leito pulmonar foram exci-sados após o sacrifício. Uma secção da zona média do pulmãodireitoetodoopulmãoesquerdoforamcolocados em formol a 10% e mantidos parafixação por no mínimo 24h.

Análisedemediadoresinflamatórios

Aanálisedosmediadoresinflamatórios(TNF-␣vs.IL-6)foi realizadacomotesteElisa(Enzyme-LinkedImmunosorbent Assay).Osvaloresdeabsorbânciaforamlidosa450nmno dispositivoparaElisa(OrganonTechnicaMicropoc¸osSystem Reader230S).Osresultadosforamexpressosempg.mL---1_.

Análisehistopatológica

Os tecidos pulmonares obtidos dos animais foram cora-doscomométodohematoxilina-eosina eexaminadoscom microscópiodeluz(OlympusBH-2)emampliaçãode200×. Seisregiõesaleatóriasforamselecionadasdecadaamostra eumaclassificaçãode0-4pontosfoifeita.Levaram-seem consideraçãoosachadoshistopatológicos,comohemorragia intersticialealveolar,infiltradodeneutrófilosintersticiale alveolar, edema e atelectasia. A classificação foi feitade acordocom a proporção daárea lesionada:0 = nenhuma lesão;1=<25%delesão;2=25-50%delesão;3=50-75% delesão;4=lesãodifusa.

Análiseestatística

OsdadosobtidosforamavaliadoscomoprogramaSPSS11.0 (Statistical Package for Social Sciences,Chicago, Illinois). OstestesdeKruskall-Wallisedoqui-quadradoforamusados paracomparar os grupos. O teste Ude Mann-Whitney foi usadoparacompararosgruposseparadamenteeacorrec¸ão de Bonferroni foi usada quando necessário. Valores de p

(4)

Grupo 1 (

SHAM

)

∆

---

-

---

-

--- n = 7

6. horas

4. horas

3. horas

0. hora

6. horas

4. horas

3. horas

0. hora

6. horas

4. horas

3. horas

2. hora

2. horas

0. hora

6. horas

4. horas

3. horas

0. hora

Histopatologia e

Bioquímica

Histopatologia e

Bioquímica

Histopatologia e

Bioquímica

Grupo 2 (IR)

ISCHEMIA REPERFUSION

∆

---

-

---

-

--- n=7

Grupo 3 (D 50)

ISCHEMIA REPERFUSION

∆

---

-

--- --- n=7

Dexmedetomidina

50 µg.kg

–1

Histopatologia e

Bioquímica

Dexmedetomidina

100 µg.kg

–1

Grupo 4 (D 100)

ISCHEMIA REPERFUSION

∆

---

-

---

--- n=7

Figura1 Representac¸ãoesquemáticadoprotocolodoestudo.

Resultados

Esteestudofoiconcluídocom28ratos,cadagrupocomsete. Ointervalodetempoparaoestudofoiomesmodescritona sec¸ãoMétodos(fig.1).

A tabela 1 mostra os valores de TNF-␣ e IL-6 e as classificações histológicas do tecido pulmonar. A análise intergrupos não revelou diferença estatisticamente signi-ficativa em relação aosvaloresde TNF-␣ e IL-6, tanto na primeiraquantonaterceirahoradereperfusão.

Aanálise estatísticadasalterações histológicas pulmo-nares foi feita com os valores médios das classificações obtidas a partir de seis áreas microscópicas examinadas. Houvediferençaestatisticamentesignificativaentreos gru-posnaclassificaçãodaslesõespulmonares(p=0,001).Lesão difusa(classificação4)em todososespécimesdoGrupo2. AsclassificaçõeshistológicasobtidasparaoGrupo2foram significativamente diferentes daquelas para os grupos 1, 3 e 4 (p=0,001 para cada comparação). Além disso, as

classificac¸õesdoGrupo1foramsignificativamentediferente daquelas dos grupos 3 e 4 (p=0,001e0,011, respectiva-mente). Nãohouve diferenc¸asignificativaentreosgrupos trêsequatro.

(5)

Tabela1 ValoresdeTNF-␣eIL-6epontuac¸õeshistológicas

Grupo1

(Sham)

n=7

Grupo2

(IR)

n=7

Grupo3

(D50)

n=7

Grupo4

(D100)

n=7

p

TNF-˛(pg.mL---1)

Reperfusão1h 9,40

(7,40-11,50)

10,10 (9,10-25,30)

9,70 (8,30-10,90)

9,70 (7,70-10,60)

0,55

Reperfusão3h 9,30

(8,20-10,90)

9,80 (9,30-22,90)

10,20 (8,70-11,80)

9,00 (8,90-12,10)

0,26

IL-6(pg.mL---1₎

Reperfusão1h 27,10

(21,60-41,30)

17,30 (13,20-52,60)

19,00 (15,80-58,00)

25,20 (20,00-48,90)

0,11

Reperfusão3h 32,70

(21,60-64,70)

61,20 (17,40-120,30)

24,40 (14,00-91,80)

31,80 (21,40-47,70)

0,83

Pontuac¸ãohistológica 0,5b

(0,0-1,0)

4,0a

(4,0-4,0)

2,5 (2,0-3,0)

2,0 (0,5-3,5)

0,001

a _Diferenc_¸a_{significativa}_no_Grupo_2,_em_comparac_¸ão_com_os_grupos_1,₃_e_4,_p_<_0,05. b _Diferenc_¸a_{significativa}_no_Grupo_1,_em_comparac_¸ão_com_os_grupos₃_e_4,_p_<_0,05.

Valoresexpressosemmediana(mínimo-máximo).

Figura2 Grupo1:estruturanormaldetecidopulmonar ven-tilado.

Figura3 Grupo2:aestruturaalveolarperdeuoseupadrão (↑), alterac¸õesenfisematosas (A),infiltrac¸ãode células infla-matóriasnoparênquima(P˙I).

Figura4 Grupo 2: infiltrac¸ão densade neutrófilos, alarga-mentodoparênquima,áreaspulmonaresnãoventiladas( )e áreasatelectásicas(A).

de neutrófilos no interstício, o espessamento de septos interalveolares,aatelectasia,acongestão,ahemorragiae oenfisemaforammenoresdoquenoGrupo2.Tecido pulmo-narnormalfoiobservadonasáreascontíguas,adespeitode levealargamentodoparênquima einfiltração de neutrófi-los.Algumasregiõesapresentaramtecidopulmonarnormal juntamentecomhemorragiaparenquimatosaintensa,áreas enfisematosas e infiltrações peribrônquicas (fig. 5). No Grupo4,asamostrasapresentaramleveinfiltraçãode neu-trófilosintersticial,espessamentodeseptosinteralveolares, atelectasia,congestãoehemorragiaemgraumuitoinferior doqueasamostrasdoGrupo2.Algumasregiões apresenta-ramtecidopulmonarcompletamentenormal(fig.6).

Discussão

(6)

Figura 5 Grupo 3: leve alargamento do parênquima e infiltrac¸ãodeneutrófilos(*),juntamentecomestruturatecidual pulmonarnormaladjacente.

Figura 6 Grupo 4: leve infiltrac¸ão inflamatória e espessa-mentodos septosinteralveolares (*),juntamentecomtecido pulmonarnormal.

induzida pela aplicação de torniquete em extremidade. Embora não tenha havido diferenças entre os grupos em relaçãoaosníveisplasmáticosdosmediadoresinflamatórios TNF-␣ e IL-6, uma diferença significativa foi observada nas alterações histológicas dos tecidos. A classificação histológicadoGrupo2foielevada,indicouefeitosdalesão de IRno tecido pulmonar. Os grupos 3 e 4 apresentaram pontuaçõesmenoresdelesão,indicaramefeitoprotetorde dexmedetomidinacontraaLIR.

Embora alguns autores ofereçam múltiplos métodos de ligação em vez da aplicação de torniquete devido à preocupaçãocomaobstruçãovenosaelinfáticaelesão mus-cularapósacompressãomecânicaprolongada,17 _o_método

deaplicac¸ãodetorniquetenãoéinvasivoeparecesermais práticonaaplicac¸ãoclínica.7,18

Diferentestemposdeisquemiaereperfusãoforam usa-dos para a indução de IR na literatura. Nós levamos em consideração a resistência do tecido contra a isque-mia.Por exemplo,alteraçõesmorfológicasimportantesno tecidomuscular surgem após 2h deisquemia e, porisso, estudosque avaliaram tecidos musculares em LIR usaram temposmaislongosdeisquemia.19,20_Uma_correlac_¸ão

impor-tante entre o tempo de isquemia e a lesão isquêmica foiobservada.21 _Considerando _os_relatos _de_lesão

histoló-gica irreversível20 _e _de _infiltrac_¸ão _difusa _de _neutrófilos18

no tecidomuscular após 3h de isquemia em estudos que avaliaramaLIRemtecidomuscular,optamosporumtempo deisquemiade3hemestudo.

Observou-seque o tempodereperfusãotambémé um fator importante na formac¸ão dos efeitos locais e

distan-tes da IR.2,7,19 _Yasin _et _al.7 _usaram _tempos _diferentes _de

reperfusãoapós 3hdeisquemiae descobriramcorrelação positiva entre o tempo de reperfusão e as disfunções orgânicas distantes. Também descobriram alterações his-tológicas após 3h de reperfusão que nãoeram aparentes nas primeiras 2h. Portanto, optamos por um tempo de reperfusão de 3h. Alterações histológicas proeminentes, comoinfiltraçãodifusadeneutrófilos,distorçãoda sequên-cia alveolar e edema no tecido pulmonar do grupo IR, sustentaram a nossa opção. Essesachados estão em con-formidade com os de estudos que usaram os mesmos tempos.7,18

TNF-␣mostrouterumpapel importantenapatogênese da síndrome de resposta inflamatória sistêmica (SRIS) e falênciademúltiplosórgãos(FMO).5,22,23_Mecanismos

seme-lhantesforamsugeridosnosefeitoslocaisedistantesdaLIR e estudosmostraramqueTNF-␣desempenhaumpapelna patogênesedalesãoorgânica.3,7_{Similarmente,}_IL-6_também

mostroudesempenharumpapelnareac¸ãoinflamatória com-plexaassociadaaotrauma,choqueeinfecc¸ão.24_Correlac_¸ão

positiva foi demonstrada entre as concentrac¸ões plasmá-ticas de IL-6e a magnitudeda lesãoem tecidos moles.24

EstudosqueavaliarammodelosdeIRemextremidades pos-terioresmostraramumaumentodeIL-6emcorrelac¸ãocom TNF-␣.5,6_Yasin_et_al.7_sugeriram _que_a_resposta

inflamató-ria relacionada àIRpodeser observadanos níveis séricos de TNF-␣ e IL-6 e que há correlac¸ão positiva entre esse aumentoelesõesdeórgãosdistantes.Osautoresavaliaram osníveissanguíneosdeTNF-␣eIL-6naprimeira,segundae terceirahoradereperfusãoapós3hdeisquemia. Descobriu--se que TNF-␣ aumentou deforma significativano fimda primeirahoraevoltouaosvaloresdecontrole nasegunda hora,enquantoosvaloresdeIL-6aumentaram progressiva-menteapósaprimeirahoradereperfusãocompiconofim daterceirahora.Portanto,avaliamososníveis sanguíneos deTNF-␣eIL-6,tantonofimdaprimeiraquantodaterceira hora.

Vários estudos clínicos e experimentais foram condu-zidos com dexmedetomidina devido às suas propriedades analgésicas, ansiolíticas e sedativas.25,26 _Além _disso,

demonstrou-se que dexmedetomidina tem propriedades anti-inflamatórias em estudos que avaliaram seus efeitos em modelosdeinflamac¸ãoisquêmicae tóxica.11 _Taniguchi

etal.11_demonstraram_que_{dexmedetomidina}_atenua_a_lesão

pulmonarediminuiastaxasdemortalidadeaodiminuiros níveisdeTNF-␣eIL-6eainfiltrac¸ãodeneutrófilosnas pare-desalveolaresemmodeloexperimentaldechoque séptico eendotoxêmico.Shen etal.27 _avaliaram_os_níveis _de

TNF--␣ e IL-6em lesãopulmonar em modelo experimental de LIR intestinal e descobriram diminuição daprodução des-sas citocinas notecidopulmonarapós a administração de dexmedetomidina.

Dexmedetomidinafoi administrada por via intraperito-neal antes28 _ou _durante12-14 _a _IR _em _modelos _de _IR _em

(7)

comparem os tempos de aplicac¸ão. Além disso, alguns estudos que avaliaram os efeitos de dexmedetomidina administradaintraperitoneal mostraramqueostemposde IRnãoforammaislongosdoque ostemposdeeliminac¸ão dedexmedetomidina.13,28_Como_o_principal_responsável_na

formac¸ão delesãopulmonaréoprocesso dereperfusãoe osníveisdeTNF-␣comec¸amasubirpertodofimda isque-mia---comníveisdepiconaprimeirahoradereperfusão---,7

consideramosrelevanteadministrardexmedetomidinauma horaantesdareperfusão.

Nãoencontramosintervaloscertosdadosede dexmede-tomidinaparaseusefeitosanti-inflamatóriosnaliteratura.A dosededexmedetomidina,administradaporvia intraperito-neal,foiestabelecidaem100␮g.kg---1_,_a_dose_mais_elevada administrada de formasegura na literaturaatual,16,28 _e _a

segundadose foiestabelecida em 50␮g.kg---1_, _para_avaliar seuspossíveisefeitosadependerdadose.

AdespeitodetempossemelhantesdeIRem estudosde LIR pulmonar após aplicac¸ão de torniquete em membros de ratos, resultados diferentes em relac¸ão aos níveis de TNF-␣ foram observados.5,18,29 _Seekamp _et _al.5 _relataram

que os níveis de TNF-␣ não foram detectados no sangue durante todo o tempode quatro horas deisquemia, mas comec¸aramaseelevarnaprimeirahoradereperfusãocom declínioapósasegundahora.Alémdisso,osníveis deIL-6 comec¸aram ase elevarnotrigésimominuto, compico no fimda quartahora.Yassinetal.7 _relataram _que _os_níveis

deTNF-␣ eIL-6atingemseuspicosna primeirae terceira hora de reperfusão, respectivamente; osníveis de TNF-␣ caíramabaixo dos níveis detectáveisapós asegunda hora dereperfusãoeIL-6atingiuníveisplasmáticosdetectáveis apartirdaprimeirahoradereperfusão.

Duru etal.,18 _Harkin _et_al.30 _e _Gaines _et _al.31 _usaram

modelos e tempos semelhantes de IR e, embora tenham observado alterac¸ões histopatológicas devido à LIR, não conseguiram observar alterac¸ões nos níveis de TNF-␣. De forma semelhante, Welbourn et al.29 _não _observaram

alteraçõesnosníveisdeTNF-␣apósareperfusãoe concluí-ram que TNF-␣ desempenha um papel na patogênese da LIRporqueasalteraçõeshistopatológicasdiminuíramcoma aplicaçãodeanti-TNF.Tambémnãoobservamosdiferenças nos níveis de TNF-␣ e IL-6 nos grupos que receberam dexmedetomidina, em comparação com o grupo Sham, apesardasdiferençashistopatológicassignificativas.

Essacondic¸ãopodeseratribuídaaonúmeroinsuficiente deanimais.Duruetal.18 _relataram _que_a_razão _pela_qual

não conseguiram demonstrar alterac¸ões no nível de cito-cinas foiporque eles podemnãoteratingido osníveis de picodeTNF-␣,poisobtiveramasamostrasdesanguenofim dasegundahoradereperfusão.Gainesetal.31 _atribuíram

essacondic¸ãoàinsuficiência deamostrasdesangue. Wel-bournetal.29 _propuseram_que_TNF-_␣ _pode_permanecer_no

tecidoapósaproduc¸ãodemacrófagospulmonarese, por-tanto,nemsemprepoderiaserdetectadonosangue---TNF-␣ podemediaralesãotecidualpulmonareativaroendotélio localmente.

A LIRinduzida commodelo deaplicação detorniquete foi histopatologicamente demonstrada neste estudo. As alteraçõesnoGrupoIRforamsignificativasemcomparação comoGrupoShameambososgruposdedexmedetomidina e isso demonstrou que o modelo foi conduzido de forma adequada. As diferenças significativas nos resultados dos

gruposdedexmedetomidina,emcomparac¸ãocomoGrupo IR,foraminterpretadascomodexmedetomidinadiminuiua lesãopulmonar.

Embora as pontuac¸ões histopatológicas entre os gru-poscom dexmedetomidina(50 e 100␮g.kg---1₎_não _tenham sidosignificativamentediferentes,algumasáreasdetecido pulmonarnormal ao examemicroscópico noGrupo D-100 sugeriram que o medicamento pode ter agido de forma dependentedadose.Estudoscomtamanhoamostralmaior ediferentesdoses,temposeviasdeadministrac¸ãopodem serconduzidosparaavaliaresseefeito.

Em conclusão,em nossoestudo de modelo experimen-taldeIRinduzidoportorniqueteem membroposteriorde ratos, dexmedetomidina foi eficaz na prevenc¸ão de lesão pulmonarinduzidaporIR.Asdiferenc¸ashistopatológicasnos níveisdeIL-6entreosdoisgruposcomdiferentesdosesde dexmedetomidina,emboranãosejaestatisticamente signi-ficativa,sugereafeituradeestudoscomamostrasmaiores paraavaliarosefeitosdedosesdiferentes.

Declarac¸ãodeimplicac¸ão

Este estudo experimental demonstra a capacidade da dexmedetomidina de reduzir a lesão relacionada à isquemia-reperfusãoexperimentalem ratos.Estudos clíni-coscontroladospodemserfeitosemhumanosparaobservar osignificadoclínicodesseefeito.

Conflitos

de

interesse

Osautoresdeclaramnãohaverconflitosdeinteresse.

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