Rev. Soc. Bras. Med. Trop. vol.14 número1

TRYPAIMOSOMA C R U ZI: AVIRULEIMCE OF THE PF STRAIN

TO C A L L IT H R IX MARMOSETS*

Humberto M enezes'*

C a l l i t h r i x j a c c h u s g e o f f r o y marmosets (Hum boldt 1812) were inject ed once subcut aneously with 10.000 parasites/ g body weight and follow ed for a period o f six mont hs. The P F st rain o f T r y p a - n o so m a c r u z i was used. Follow -up was done through blood cult ures, xenodiagnosis, serological tests, and ECG. A small number o f normaI animais served as cont rol.

I N T R O D U C T I O N

B l a n c h a r d 1 , La v e r a n 6 , B r u m p t 2 , M ay e r an d

Ro c h a Li m a 9 , an d r e c e n t l y , o t h e r in v e st i ga t o r s

h ave r e p o r t e d t h a t a n i m a i s w h i c h su r v iv e d a v i r u l e n t i n f e c t i o n w i t h T r y p a n o so m a c r u z i b e cam e r e sist a n t t o a su b se q u e n t ch all e n ge

w i t h t h i s p ar asit e .

D i f f e r e n t p r o ce d u r e s h ave b e e n u t i l i ze d o ve r t h e y e a r s b y se ve r al i n v e st i ga t o r s se a r ch in g f o r p r o t e ct i o n a g a in st f u r t h e r v i r u l e n t T. c r u z i i n f e c t i o n s: i n j e c t i o n o f l o w -v i r u le n ce p ar asit e s

( N o r m a n an d Ka g a n 2 2 ; Ka ga n an d N o r m a n 5 ; M ar r an d Pi k e 8 ; Se a h an d M ar sd e n 2 6 ) ; in j e ct i o n

o f k i l l e d p ar asi t e s ( So l t y s2 8 ; N e al an d Jo h n ­

so n 2 1 ) ; o f f la g e l l a t e f r a c t i o n s (Se gu r a , Cu r a , Pa u lo n e , V a sq u e z an d Ce r i so l a 2 7 ) ; o f m o le ­ c u l a r f r a c t i o n s o f ce l l s f r o m i m m u n i ze d h o st s

( Le m o s an d M e n e ze s7 ); an d o f su b ce l lu l a r f r a c t i o n s o f r e l at e d p ar asi t e s ( G r y m b e r g , N e r i- G u im a r ã e s, Ca st r o an d O l i v e i r a Li m a 4 ).

In j e c t i o n o f l o w -v i r u le n ce p ar asi t e s ( P i zzi an d Pr a ge r 2 4 ) o r o f a v i r u l e n t st r a in , im m e d ia -

t e l y f o l l o w e d b y t r e a t m e n t ( P i z z i 2 5 ) se e m s t o be t h e m o st e f f e ct i v e t e ch n i q u e so f a r e m p lo

-y e d t o o b t a i n e f f i c i e n t p r o t e ct i o n . Th e se o b se r - v a t io n s h ave b ee n c o n f i r m e d b y im m u n o lo g ica l

t e ch n iq u e s, w h i c h d e m o n st r a t e t h at t h e in f e c- t ed a n im a is d e v e lo p a n t i b o d i e s an d im m u n o lo gi-

c a l l y co m p e t e n t ce ll s again st t h e f lage lla t e s. A p r o b le m p o se d b y t h i s t e ch n iq u e is t h e

d an ge r o f i n f e c t i o n w i t h t h e lo w -v ir u le n ce

p r o t o zo a , w h i c h , a l t h o u g h lo w v i r u l e n t , co u lci i n d u ce p at e n t p a r asit e m ia in t h e in je ct e d a n i ­ m ais. A n a d d i t i o n a l p r o b le m is t h e m a n d a t o r y t r e a t m e n t o f al i a n im a is in je t e d w i t h a v i r u l e n t st r a in .

In j e c t i o n o f p a r a si t i c f r a c t i o n s o r o t h e r m o le cu l a r d e r iv a t iv e s o f t h e in f e ct e d an im a is

o p e n s a p r o m issin g n e w f i e l d in t r y p a n o so m i a si s

r e se ar ch , b u t w i l l n o t b e d iscu sse d h er e. M y d i scu ssi o n w i l l b e l i m i t e d ío t h e a v ir u le n ce o f

a st r a in o f T. c r u z i i.e. a t r y p a n o so m a u n ab le t o i n d u ce d ise ase o r p ar a sit e m ia , o r t o p r o d u ce p o sit i v e se r o lo g ica l t e st s w h e n in je ct e d in a

su it a b i e d o se an d b y an ad e q u a t e r o u t e . In 1 9 6 8 , I d e scr i b e d su ch a p ar asi t e (M e n e ze s1 0 ) as a p r o b a b le m ist u r e o f m u t an t s o f t h e y

st r a in , r e p o r t e d b y Pe r e ir a d a Si l v a an N u sse n z- w e i g 23 (as b e in g h i g h l y v i r u l e n t t o m ice . In a

This w ork was support ed by Grant SIP 08/ 42 o f the Conselho Nacional de Desenvolviment o Cient ífico e Tecnológico (CNPq).

* * Depart ament o de Genét ica, Faculdade de M edicina de Ribeirão Pret o, USP, 14.100 — Ribeirão Pret o — São Paulo — Brasil.

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Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. XIV - N °s 1 - 3

p ap e r co au t h o r e d b y A l b u q u e r q u e (M e n e ze s

an d A l b u q u e r q u e 1 3 ) t h i s st r a in w as n am e d

P F

, an d it h as b ee n m y o b j e ct i v e ever si n ce t o d e m o n st r a t e it s a v ir u le n ce , e m p h a si zi n g at t h e

sam e t i m e t h at , d u e t o it s live v a ccin e n at u r e , it sh o u l d n o t b e u se d i n d i sc r i m i n a t e l y .

In 1 9 7 0 (M e n e ze s1 2 ), I d e scr i b e d t h e f i r st

e xam p le s o f a n im a is in j e ct e d w i t h a v e r y h igh d o se o f p ar asit e s w h i c h , a l t h o u gh t h e y p r e se n -

t ed p o sit i v e b l o o d cu lt u r e s, gave n e gat ive r e su lt s w h e n i n o cu l a t e d in t o b a b y m ice in cu lt u r e f o r m . T h e st u d y p r e se n t e d h er e w as

car r ie d o u t o n

C a llith rix jacchus g e o ffro y

m ar m o se t s, an d co n ce r n s t h e t e st s p e r f o r m e d

b e f o r e v a cci n a t i o n an d t h r o u g h o u t t h e si x m o n t h p e r io d f o l l o w i n g i n j e ct i o n o f t h e av ir u - len t st r ain .

M A T E R I A L S A N D M ET H O D S

Anim ais

Si x t e e n

C a llith rix jacchus g e o ffro y

m a rm o ­ set s ( H u m b o l d t 1 8 1 2 ) — 9 m ale s an d 7 f e m a le s

— w er e va ccin a t e d o n ce su b cu t a n e o u sl y ( Fi g . 1) M ean w e i gh t at t h e b e gin n i n g o f t h e e x p e rim e n t w as 3 1 6 .3 ± 7 9 .5 g f o r t h e m ale s, an d 3 3 1 .7 ±

3 7 .7 g fo r t h e fem ales. T h e Controls w er e 8 si m il ar m ar m o se t s, 5 m ale s w i t h a m ean w e i gh t

o f 2 8 1 .8 ± 7 2 .2 g, an d 3 f e m a le s w i t h a m ean w e i gh t o f 3 8 4 .0 ± 7 2 .2 g. A l i a n im a is w er e

t r a p p e d in t h e ir n at u r a l h a b i t a t (ali at t h e sam e lo ca t i o n ) an d w e r e h o u se d in cage s c o n t a i n i n g

o n e co u p le e ach w h e n e v e r p o ssi b le . A l i a n im a is w er e k e p t u n d e r t h e sam e e n v i r o n m e n t a l an d

n u t r i t i o n a l co n d i t i o n s. Th e d ie t co n sist e d m ain - ly o f f r u i t (b an an a, p ap aya an d o r a n ge s), w it h p r o t e in p r o v id e d b y n o n -f a t m i l k an d d e h y - d r at e d so u p s (m e at o r c h i c k e n w i t h ve ge t ab le s) m ix e d w it h b r e ad . A l i a n im a is r e ce iv e d a vi t a-

m in s u p plem ent o n ce a w e e k b y o r a l ro u te (1 0 .0 0 0 IU v i t a m in A , 2 0 0 0 IU v i t a m i n D , an d

1 0 0 m g v i t a m i n C ;; ), an d h ad f r e e acce ss t o w at e r .

Vaccine

Th e v a ccin e u sed w as a su sp e n si o n o f t h e

PF

st r a in o f

T. cruzi

h ar ve st e d a cco r d i n g t o a p e r so n al m o d i f i c a t i o n o f t h e N a k a m u r a 20

t e ch n iq u e . U n co a gu la t e d an d u n f il t e r e d W ar r e n m e d iu m (W a r r e n 3 0 ) w as p u t in t o ce ll o p h a n e

b ags, w h i ch w e r e p la ce d in t o Er l e n m e y e r ' s

f l a sk s c o n t a i n i n g t w i ce t h e a m o u n t o f PB S so l u t i o n , p H 7 .2 . T h e m at e r ia l w as st e r il ize d in an a u t o cla v e f o r 1 5 m in u t e s at 1 1 5 °C . Th e

p ar asit e cu lt u r e s, 1 4 d a y s o l d , w e r e r in se d

t w i c e in salin e so l u t i o n an d r e su sp e n d e d in st e r il e sa lin e af t e r ce n t r i f u g a t i o n at 1 5 0 0 r p m .

Th e f l a g e ll a t e su sp e n si o n co n t a i n e d 2 x 1 0 7 p a r asi t e s/ m l, w i t h a b o u t 8 0 % m o b i l e f o r m s, an d 0 .2 6 % t r y p o m a st i g o t e f o r m s (o ve r 5 0 0 0

p ar asit e s w e r e co u n t e d o n f i v e d i f f e r e n t slid e s st ai n e d w i t h G ie m sa ).

Fig. 1 — C a l l i t h r i x j a c c h u s g e o f f r o y i (Hum boldt , 1812)

Ea c h a n im a l w as in j e ct e d su b cu t a n e o u sl y

w i t h 1 0 ,0 0 0 p ar asit e s/ g b o d y w e i gh t sh o r t l y af t e r p r e p a r a t io n o f t h e v a ccin e . A n ECG e ach m ar m o se t w as t a k e n o n ce b e f o r e , and se ve r al t i m e s a f t e r , v a c c i n a t i o n . T h e t e st w as

p e r f o r m e d in a F U N B E C a p p a r a t u s, u sin g t h e 1 2 st an d ar d lead s. Pr io r t o t h e t e st , each a n im a l w as in je ct e d su b c u t a n e o u sl y w it h

JaneijxKJunho, 1981

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

75

Blood Cultures

H e m o cu lt u r e s w er e ca r r ie d o u t in t u b e s

(2 p er a n im a l) co n t a i n i n g 5 m l o r i g i n a l W ar r e n m e d iu m (W ar r e n 3 0 ). T h e c u l t u r e s w e r e e xa-

m in ed 3 0 an d 4 5 d a y s lat e r . T h i s t e st w as also p e r f o r m e d b e f o r e a n d af t e r v a cci n a t i o n .

Xenodiagnosis

T h i s t e st w as ca r r ie d o u t b e f o r e an d af t e r

v a ccin a t io n o f t h e a n im a is. Si x n y m p h s, 5 t h

in st ar , o f

Rhodnius neglectus

w e r e u se d f o r

each t e st . Th e t r i a t o m i n a e w e r e e x a m in e d

30 an d 4 5 d a y s a f t e r t h e in se ct s f e d o n m ar -

m o se t b l o o d . T h e lat e st e x a m i n a t i o n w as

a l w a y s ca r r ie d o u t o n t h e se d im e n t o f a p o o l

o f t h e in t e st i n a l c o n t e n t s o f t h e r e m ai n i n g

in se ct s, a f t e r su sp e n si o n in salin e so l u t i o n

an d c e n t r i f u g a t i o n at 1 5 0 0 r p m .

In d ire c t H em agglutination Test (IH T )

T h i s t e st w as ca r r ie d o u t u sin g a f i l t e r p ap e r b lo o d sm ear , f o l l o w i n g t h e t e ch n iq u e

d e scr i b e d b y So u za an d Ca m a r g o 29 f o r t h e im m u n o f lu o r e sc e n ce t e st . Th e sm e ar s w er e

k e p t in a d ee p f r e e ze r u n t i l t h e t i m e o f t h e t e st . Th e e lu a t e s w e r e e m p lo y e d a cco r d in g

t o t h e m e t h o d o f Cam ar go et a l .3 af e t e r in ac- t i v a t i o n at 5 6 °C f o r 3 0 m in u t e s, an d ce n t r i ­

f u g a t i o n at 1 5 0 0 r p m f o r 1 5 m in u t e s. Th e se n sit ize d r ed ce ll s w er e k i n d l y su p p li e d b y t h e la b o r a t o r y o f D r . M .E. Ca m ar go ( In st i ­

t u t o d e M e d icin a T r o p i c a l , U SP, Sã o Pau lo ).

R E S U L T S

B ody Weight

Ta b l e I sh o w s t h at b o t h v a ccin a t e d an d

co n t r o l a n im a is lo st w e i gh t d u r i n g t h e 6 m o n t h s d u r a t i o n o f t h e e x p e r i m e n t .

T A B L E I

B o d y W e igh t o f Ex p e r i m e n t a l an d Co n t r o l G r o u p s

G r o u p T o t a l Se x In i t i a l W e igh t Fi n a l W e igh t W e igh t Ch an ge To t a l

N u m b e r (%)

M F M F M F M F

V a c c i n a t e d 1 6 9 7 3 1 6 ± 7 9 g 3 3 2 ± 3 8 g 1 7 3 ± 8 6 g 3 2 6 ± 4 5 g - 1 4 % - 1 . 8 % - 1 5 . 8 %

Co n t r o l 8 5 3 2 8 2 + 7 2 g 3 8 4 ±7 1 g 2 7 6 ± 6 0 g 3 4 9 ± 7 6 g - 2 % - 9 . 1 % - 1 1 . 1 %

ECG

T h i s t e st r e ve ale d a b n o r m a l i t i e s f o r o n l y a f e w a n im a is. T h e r ead er is r e f e r r e d t o Ta b l e II w h e r e t h e r e su l t s h ave b ee n su m m a r ize d . Th e

c a r d i o l o g i st w h o co l l a b o r a t e d in t h i s in v e st i- ga t i o n co n cl u d e d t h a t n o e sse n t ial a b n o r m a l i ­ t i e s w e r e f o u n d in t h e e x p e r i m e n t a l a n im a is

a f t e r v a c c i n a t i o n . N o p o sit i v e se r o lo gic a l t e st s

w e r e o b t a i n e d f o r a n y a n im a l sh o w in g ECG a b n o r m a l i t i e s.

X e n o d i a g n o si s

T a b l e U l su m m a r i ze s t h e x e n o d i a g n o si s

r e su l t s o b t a in e d f o r e x p e r i m e n t a l an d co n t r o l

a n im a is. O n t h e ave r age , t w o t e st s w er e p e r ­ f o r m e d b e f o r e , an f 5 a f t e r , v a cci n a t i o n o f t h e e x p e r i m e n t a l g r o u p . A n ave r age o f 4 xe n o d ia -

gn o se s w e r e p e r f o r m e d f o r t h e c o n t r o l d u r in g t h e 6 m o n t h s o f o b se r v a t io n . Th e r e su l t s w er e

a l w a y s n e gat ive f o r b o t h gr o u p s.

B lo o d Cultures

76

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. XIV - N9s 1 - 3

cultures per animal were performed for the Cont rols t hr oughout t he 6 m ont hs of

observa-t ion. As in observa-t he preceding observa-tesobserva-t , ali resulobserva-t s were

negat ive (Table III).

T ABLE II

ECG Resul t s f or t he Experiment al and Cont rol Groups

Marmoset s

Experiment al

Cont rol

Ident ifi­

cat ion

Sex

Bef ore Vac­

cinat ion

Af t er vac­

cinat ion

Duri ng t he 6 mont hs'

observat ion

5

M

L AVB 1/ B

(1)

LAVB 1/ 2B (3)

6

M

N

(1)

N

(4)

12

M

L AVBB 1 st

(1)

N

(4)

13

M

N

(1)

N

(4)

14

F

N

(1)

N

(4)

37

F

N

(1)

N

(4)

22

M

N

(1)

N

(3)

25

F

N

(1)

N

(3)

30

F

N

(1)

N

(3)

31

M

N

(1)

N

(4)

32

F

RAVB 1/ 2B

(1)

RAVB 1/ 2B (4)

33

F

N

(1)

N

(3)

34

F

N

(1)

N

(3)

35

M

N

(1)

N

(3)

44

M

N

(1)

N

(3)

99

M

N

(1)

N

(3)

17

M

N

(3)

19

F

Sinusal r yt hm

(2)

26

M

N

(4)

47

M

N

(3)

4

M

RVBB

(3)

7

F

N

(2)

11

M

N

(2)

8

F

N

(2)

LAVB 1/ 2B = Lef t ant erior vent ricular branch hemi-block

N = normal

LAVBB 1 st = Lef t ant erior vent ricular branch bl ock — f irst degree. ( ) = Number of t est s

RAVB 1/ 2B = Ríght ant erior vent ricular branch hemi-block.

performed

I n d i r e c t H e m a g g l u t i n a t i o n T e st ( I H T )

Before vaccinat ion t he IHT was negat ive in

100% of t he marmoset s. Af t er vaccinat ion,

93. 8% of t he t est s remained negat ive while

onl y of 16 animais (6. 2%) became serologically

posit ive, but wit h ali t he parasit ological t est s

negat ive (Table III) , i.e. t he t wo posit ive t est s

of t he experiment al group belonged t o t he

same animal.

78

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. XIV - N 9 s 1 - 3

D I SCU SSI O N

Th e m ain o b j e ct iv e o f t h i s st u d y w as t o d e m o n st r at e t h e a v ir u le n ce o f t h e P F st r a in o f

T. c r u z i t o m ar m o se t s, w h e n a d m in i st e r e d in

a p p r o p r i at e d o se s an d b y an ad v an t a ge o u s

r o u t e , as is t h e case w i t h a n y o t h e r t y p e o f v a ccin e , live o r n o t .

Th e o n l y r e l ia b le m e a n s o f d e t e c t i o n o f

p r e su m p t iv e t r y p a n o so m i a si s a v a il a b le t o u s at p r e se n t ar e t h o se u t i l i ze d in t h i s st u d y . U n t i l t h e t i m e w h e n an i n f a l l i b l e d i a g n o st i c

t e st f o r t r y p a n o so m a i n f e c t i o n s is d e v e lo p e d w e m u st be sa t isf ie d w i t h w h a t p a r a si t o l o g i st s t h e w o r l d o ve r co n sid e r a v a il a b le e v id e n ce o f

t r y p a n o so m i a si s, i.e. p o sit i v e x e n o d i a g n o si s, b lo o d cu l t u r e , se r o lo g ica l t e st s a n d , w h e n e ve r

p o ssi b l e , h i st o p a t h o l o g i ca l f i n d i n g s. Ea c h o f t h ese t e st s h as it s l i m i t a t i o n s w h e n p e r f o r m e d se p ar at e ly , b u t t h e ch an ce s o f d i a g n o si s in cr e ase w h e n t h e y ar e e m p l o y e d t o ge t h e r an d r e p eat ed

m o r e t h an o n ce .

Co n sid e r in g t h ese a r gu m e n t s an d o n t h e

b asis o f t h e p r e se n t e x p e r i m e n t , I ca n co n c l u d e o n ce m o r e t h a t , w h e n u t i l i ze d a d e q u a t e l y , t h e

P F live v a ccin e o f T. c r u z i is a v ir u le n t .

I h ave a l r e a d y d e m o n st r a t e d t h a t n o in f e c- t i o n co u l d b e d e t e ct e d in d i f f e r e n t an im a l

sp e cie s, i n c l u d i n g m an , af t e r t h e p r o p e r u se o f t h e P F st r a in o f T. c r u z i (M e n e ze s1 1 ; M en e ze s an d R i b e i r o 1 4 ; M e n e ze s1 5 -1 6 , 1 1 A 9 ).

RESU M O

C a l i t r i ci d e o s d a e sp é ci e C. j a c c h u s g e o f f r o y i

( H u m b o l d t , 1 8 1 2 ) v a ci n a d o s u m a ú n i v a vez ,

su b c u t a n e a m e n t e , c o m 1 0 . 0 0 0 p a r a si t a s/ g d e

p e so co r p o r a l , f o r a m se g u i d o s d u r a n t e u m p e ­

r í o d o d e se i s m e se s. U so u - se c o m o v a ci n a a

ce p a P F d e T . c r u zi .

O se g u i m e n t o f o i f e i t o a t r a v é s d e h e m o c u l

-t ur a s, x e n o d i a g n ó st i c o s, t e st e s se r o l ó g i c o s e

E C G . U m p e q u e n o n ú m e r o d e a n i m a i s se r v i u

c o m o c o n t r o l e n o r m a ! .

A C K N O W L E D G M E N T S

I am g r a t e f u l t o D r . F . V i c c h i ( Fa c u l t y o f M sd ici n e o f Ri b e i r ã o Pr e t o ) w h o a n a l y ze d t h e ECG t est s.

R E F E R E N C E S

1. B L A N C H A R D , M . 1 9 1 2 . M ar ch e d e 1' in f

ec-t i o n à Sc h y z o t r i p a n u m c r u z i ch e z le

c o b a y e et Ia so u r ís. Bu l l e t i n d e Ia

So c i e t é d e P a t h o l o g i e E x o t i q u e 5, 5 9 8 - 5 9 9 .

2 . B R U M P T , E. 1 9 1 3 . Im m u n i t é p ar t ie ll e d an s les i n f e c t i o n s à T r y p a n o so m a

c r u z i ; t r a n sm i ssi o n d e ce t r y p a n o so m e

p ar C i m e x r o t u n d a t u s. Rô l e r e gu la t e u r d e s h ô t e s i n t e r m e d i a ir e s. Passage à t r av e r s Ia p eau . Bu l l e t i n d e Ia So c i e t é

d e P a t h o l o g i e E x o t i q u e 6 , 1 7 2 -1 7 6 .

3 . C A M A R G O , M .E., H O SH I N O , S. A N D

S I Q U E I R A , G . R . V . 1 9 7 3 . H e m a gglu t i -

n a t i o n w i t h p r e se r ve d , se n sit ize d ce ll s,

p r a c t i c a l t e st f o r r o u t i n e se r o lo çic a l d ia g n o si s o f A m e r i c a n t r y p a n o so m i a ­ sis. R e v i st a d o In st i t u t o d e M e d i c i n a

T r o p i ca l d e Sã o P a u l o 1 5 , 81 -8 5 .

4 . G R Y M B E R G , N „ N E R Y - G U I M A R Ã E S , F. , C A S T R O , F . T . A N D O L I V E I R A L I M A , A . 1 9 7 7 . T h e e f f e c t o f t h e

i n j e c t i o n o f r ib o so m e s an d R N A f r o m

Cr i t h i d i a f a sci cul a t a o n t h e e x p e r i ­

m e n t a l i n f e c t i o n o f m ice b y T r y p a ­

n o so m a cr u z i . T r a n sa ct i o n s o f t he

R o y a l So c i e t y o f T r o p i ca l M e d i c i n e

a n d H y g i e n e 7 1 , 3 5 - 3 6 .

5 . K A G A N , I . G . , A N D H O R M A N , L. 1 9 6 1 .

Im m u n o l o g i c st u d ie s o n T r y p a n o so m a

c r u z i . I I I D u r a t i o n o f a cq u i r e d im m u - n i t y in m ice i n i t i a l l y in f e ct e d w i t h a

N o r t h A m e r i c a n st r a in o f T r y p a n o so ­

m a cr u z i . J o u r n a l o f I n f e c t i o n s Di se a

-se s 1 0 8 , 2 1 3 - 2 1 7 .

6 . L A V E R A N , A . 1 9 1 2 . Essa is d ' i m m u n i sa

-t i o n co n -t r e d e s -t r y p a n o so m e s p a-t h o - ge n s. Bu l l e t i n d e Ia So c i e t é d e P a t h o ­

l o g i e E x o t i q u e 5 , 8 7 7 - 8 8 2 .

7 . L EM O S, M . V . F. A N D M E N E Z E S, H . 1 9 7 8 . T h e e f f e c t o f an im m u n e R N A

( R N A i ) a ga in st T r y p a n o so m a c r u z i i n f e c t i o n in m ice . T r o p e n m e d i z i n u n d

Pa r a si t o l o gi e 2 9 , 1 1 9 - 1 2 6 .

8 . M A R R , J. S. A N D P I K E , E. H . 1 9 6 7 . T h e p r o t e c t i o n o f m ice b y " Co r p u s Ch r i s-

t i " st r a in o f T r y p a n o so m a c r u z i w h e n ch a ll e n ge d w i t h " B r a z i l " st r a in . J o u r ­

n a l o f P a r a si t o l o g y 5 3 , 6 5 7 - 6 5 9 .

9 . M A Y E R , M . A N D R O C H A L I M A , H . 1 9 1 4 . Zu m V e r h a l t e n v o n Sc h i z o t r y

-p a n u m c r u z i im W a r m b l u t e r n u n d

A r t h r o p o d e n . A r c h i v f ü r Sc h i f f s u n d

T r o p e n h y g i e n e 1 8 , 1 0 1 - 1 3 6 . in P I Z Z I ,

T . 1 9 6 1 , o p . c i t . j

JaneiroyJunho, 1981

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

79

T r y p a n o so m a c r u z i a ga in st e x p e r i m e n ­

t a l i n f e c t i o n in m ice . Re v i st a d o I n s ­

t i t u t o d e M e d i c i n a T r o p i ca l d e Sã o

P a u l o 1 0 , 1 -1 4 .

1 1 . M E N E Z E S, H . 1 9 6 9 . A c t i v e i m m u n i za t i o n

o f d o gs w i t h a n o n v i r u l e n t st r a in o f

T r y p a n o so m a cr u z i . Re v i st a d o I n s ­

t i t u t o d e M e d i c i n a T r o p i ca l d e Sã o

P a u l o 1 1 , 2 5 8 - 2 6 3 .

1 2. M E N E Z E S, H . 1 9 7 0 . I. Th e a v i r u l e n t o f t h e c u l t i v a t e d Y st r a in o f T r y p a n o so ­

m a cr u z i . Re v i st a d o In st i t u t o d e M e ­

d i c i n a T r o p i ca l d e Sã o P a u l o 1 2 ,

6 4 - 6 8 .

13 . M E N E Z E S, H . A N D A L B U Q U E R Q U E , R.

D . R . 1 9 7 0 . Im u n i za ç ã o d e ca m u n - d o n g o s co m " v a c i n a " vi va a v ir u le n t a d e T r y p a n o so m a cr u z i . I V . V a r i a ç ã o

d o m e i o d e c u l t u r a . Re v i st a d a So c i e ­

d a d e Br a si l e i r a d e M e d i c i n a 4 , 6 9 - 7 4 .

1 4 . M E N E Z E S, H . A N D R I B E I R O , R . D . 1 9 7 2 . T h e a v ir u le n ce o f t h e cu l t i v a t e d

" P F " st r a in o f T r y p a n o so m a cr u z i . V . T h e e v a l u a t i o n o f p a r a si t o l o g i c

t e st s a f t e r v a c c i n a t i o n o f d i f f e r e n t a n im a l sp e cie s. Re v i st a d a So c i e d a d e

Br a si l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i ca l 6 ,

4 1 - 4 8 .

1 5 . M E N E Z E S, H . 1 9 7 2 . T h e a v ir u le n ce o f t h e c u l t i v a t e d Y st r a in o f T r y p a n o so m a

c r u z i . I V . T h e e f f e c t o f im m u n o su p -

p r e ssive age n t s in m ice . Re v i st a d a S o ­

ci e d a d e Br a si l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i ­

c a l 5 , 2 1 3 - 2 3 5 .

1 6 . M E N E Z E S, H . 1 9 7 4 . T h e a v ir u le n ce o f t h e c u l t i v a t e d PF st r a in o f T r y p a n o so m a

cr u z i . V I . T h e e f f e c t o f a n t i l y m p h o c y - t i c se r u m in d o gs. Re v i st a d a So c i e d a ­

d e Br a si l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i ca l 8 ,

2 5 2 - 2 5 7 .

1 7 . M E N E Z E S, H . 1 9 7 5 . T h e u n - i n f e c t i v i t y o f

t h e PF c u l t i v a t e d st r a in o f T r y p a n o so ­ m a c r u z i t o m ice . A n e v a lu a t i o n

t h r o u g h a o n e y e ar p e r io d b y b l o o d c u l t u r e s a n d h ist o p a t h o l o g y . Re v i st a

d a So c i e d a d e Br a si l e i r a d e M e d i c i n a

T r o p i ca l 9 , 1 -5.

1 8 . M E N E Z E S, H . 1 9 7 6 . A a v i r u l ê n c i a , p ar a

ca m u n d o n g o s, d a ce p a PF d o T r y p a ­

n o so m a cr u z i . A v a l i a ç ã o p o r xe n o -

d i a g n ó st i c o , cu l t u r a d e v f sce r as e h is- t a p a t o l o g i a e scal o n ad a. Re v i st a d a

A sso c i a ç ã o M é d i c a Br a si l e i r a 2 2 , 111 -

114

.

1 9 . M E N E Z E S, H . 1 9 7 6 . A v a cin a çã o d e ser es h u m a n o s c o m a v a cin a v i v a a v ir u le n t a

d e T r y p a n o so m a cr u z i . Se g u im e n t o d u r a n t e c i n c o an o s d o s d o i s p r i m e ir o s

caso s. Re v i st a d a A sso c i a ç ã o M é d i ca

Br a si l e i r a 2 2 , 2 5 2 -2 5 5 .

2 0 . N A K A M U R A , M . 1 9 6 7 . Cu l t i v a t i o n o f

T r y p a n o so m a c r u z i in a p r o t e in -f r e e

d i a l y sa e t m e d iu m . P r o c e e d i n g s o f t he

So c i e yt o f E x p e r i m e n t a l Bi o l o g y a n d

M e d i c i n e 1 2 5 , 7 7 9 -7 8 0 .

2 1 . N E A L , R . A . A N D JO H N SO N , P. 1 9 7 7 . Im m u n i za t i o n again st T r y p a n o so m a

c r u z i u si n g k i l l e d an t ige n s an d w it h

sa p o n in as ad j u v a n t . A c t a T r op i ca 3 4 , 8 7 - 9 6 .

2 2 . N O R M A N , L. A N D K A G A N , G. 1 9 6 0 .

Im m u n o l o g i c st u d ie s o n T r y p a n o so m a

cr u z i . I I . A c q u i r e d i m m u n i t y in m ice in f e ct e d w i t h a v i r u l e n t A m e r i ca n

st r a in o f T r y p a n o so m a cr uz i . J o u r n a l

o f I n f e c t i o u s D i se a se s 1 0 7 , 1 6 8 -1 7 4 . 2 3 . P E R E I R A D A S I L V A , L. H . A N D N U

S-SE N Z W E I G , V . 1 9 5 3 . So b r e u m a cepa d e T r y p a n o so m a c r u z i alt am e n t e vir u - le n t a p ar a o ca m u n d o n g o b r a n co . F o ­

l i a Cl i n i c a e Bi o l o g i c a 2 0 , 1 9 1 -2 0 8 . 2 4 . P I Z Z I , T . A N D P R A G E R , R. 1 9 5 2 . Im u

-n id ad a Ia so b r e i n f e cci ó n in d u ci d a

m e d ia n t e c u l t i v o s d e T r y p a n o so m a

c r u z i a v i r u l ê n c i a at e n u ad a. (Co m u n i -

c a ci ó n p r e l i m i n a r ) . Bo l e t i n d e i nf o r

-m a c i o n e s p a r a si t a r i a s ch i l e n a s 7 , 20- 2 1.

2 5 . P I Z Z I , T . P . 1 9 6 1 . Im u n o l o g i a d e Ia e n f er -m e d ad d e Ch aga s: Est a d o act u al d ei

p r o b le m a . Bo l e it i d e Ia O f i ci n a Sa n i

-t a r i a P a n a m e r i ca n a 5 1 , 4 5 0 - 4 6 4 .

2 6 . SE A H , B. A N D M A R SD E N , P.D . 1 9 6 9 .

Th e p r o t e ct i o n o f m ice agai n st a v i r u l e n t st r a in o f T r y p a n o so m a cr u z i b y p r e v io u s i n o c u l a t i o n w i t h an av i­

r u l e n t st r a in . A n n a l s o f T r o p i ca l

M e d i c i n e a n d P a r a si t o l o gy 6 3 , 211 - 2 1 4 .

2 7 . S E G U R A , E., C U R A , E. N . , P A U LO N E ,

I. , V A SQ U E Z , C. A N D C E R I S O L A , J. A . 1 9 7 4 . A n t i g e n i c m ak e u p o f su b -

c e l l u l a r f r a c t i o n s o f T r y p a n o so m a

cr uz i . J o u r n a l o f P r o t o z z o l o g y 2 1 ,

5 7 1 - 5 7 4 .

2 8 . S O L T Y S , M .A . 1 9 6 4 . Im m u n i t y in t r y ­ p a n o so m i a si s. V . Im m u n i za t i o n o f

a n i m a i s w i t h d e ad t r y p an o so m e s.

P a r a si t o l o g y 5 4 , 5 8 5 -5 9 1 .

2 9 . SO U Z A , S . L . A N D CA M A R G O , M .E. 1 9 6 6 . T h e u se o f f i l t e r p ap e r b lo o d

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Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

Vol. XTV - N °s 1 - 3

f o r A m e r i c a n t r y p a n o so m i a si s se r o - d ia gn o sis. R e v i st a d o I n st i t u t o d e

M e d i c i n a t r o p i ca l d e Sã o P a u l o 8 ,

2 2 5 - 2 5 8 .

3 0 . W A R R E N , L . G . 1 9 6 0 . M e t a b o l ism o f

Sc h i z o t r y p a n u m c r u z i , Ch aga s.

Ef f e c t o f c u l t u r e age a n d su b st r at e

c o n c e n t r a t i o n o n r e sp i r a t o r y r at e .

J o u r n a l o f P a r a si t o l o g y 4 6 , 5 2 9 -