Revista da Sociedade Bra sileira d e M e d ic in a Tropical 29(V:27-32, ja n -fev, 1996.
D I A G N O S T I C T E S T S F O R A M O E B I C L I V E R
A B S C E S S : C O M P A R I S O N O F E N Z Y M E - I J N K E D
I M M U N O S O R B E N T A S S A Y ( E L I S A ) A N D
C O U N T E R I M M U N O E L E C T R O P H O R E S I S ( C I E )
Marco s I. Re s tre p o , Zo r a id a Re s tre p o , Co n s u e lo Ló p e z Els a Villare al,
Au r a Agu ir r e a n d Ma rc o s Re s tre p o
T h e li v e r a b s c e s s is th e m o s t f r e q u e n t e x t r a i n t e s t i n a l c o m p l i c a t i o n o f i n t e s t i n a l a m o e b ia s is : its d i a g n o s i s is s u g g e s te d b y th e c l i n i c a i p i c t u r e b u t it m t i s t b e c o n f i r m e d b y p a r a c l i n i c tests. T h e m o s t s t r i n g e n t d i a g n o s i s r e q u i r e s i d e n t i f i c a t i o n o f E . h i s t o i y t i c a . B u t tb is i s p o s s i b le o n l y in a f e w c a se s. S e r o l o g ic a l te sts g r e a t l y im p r o v e th e d i a g n o s i s o f th is s e v e r e c o m p l i c a t i o n o f a m o e b ia s i s . W e c o m p a r e d t h e E n z y m e L i n f e d I m m u n o s o r b e n t A s s a y a n d th e C o u n t e r i m m u n o e l e t r o p h o r e s i s t e c h n i q u e s . B o th t e c h n i q u e s w e r e u s e d to d e te c t a m o e b i c a n t i b o d i e s in 5 0 c o n t r o l p a t i e n t s , 3 0 p a t i e n t s w it h li v e r a b s c e s s a n d 3 0 p a t i e n t s w it h i n t e s t i n a l a m o e b ia s i s . A l i th e s e r a f r o m c o n t r o l p a t i e n t s g a v e n e g a ti v e
re s u lts i i n b o th t e c h n i q u e s . W h e n a n a l y s i n g t h e s e r a f r o m p a t i e n t s w it h i n t e s t i n a l a m o e b ia s is , 1 0 % o f t h e m w e r e p o s i t i v e b y E L IS A b u t n o n b y C IE. T h e s e r a o f p a t i e n t s w ith liv e r a b sc e s s, w e f o u n d t h a t 9 0 % w e r e p o s i t i v e b y th e E L IS A m e t h o d a n d 6 6 .6 % b y th e C IE t e c h n i q u e . I n p a t i e n t s w it h a m o e b i c li v e r a b sc e s s, th e r e s u lts s h o w e d t h a t th e E L IS A w a s m o r e s e n s iti v e t h a n th e CIE, a s i t p r e s e n t e d a h i g h e r s e n s i t i v i t y ( 1 0 0 % ) t h a n t h a t o f th e C IE t e c h n i q u e (6 6 % ) .
K e y -w o r d s : A m o e b i c li v e r a b s c e s s . D ia g n o s is . E L IS A . CIE.
A m o e b i a s i s i s a n i n f e c t i o n c a u s e d b y E n ta m o e b a h is to iy tic a , a n i n t e s t i n a l p r o t o z o a n p a t h o g e n i c f o r h u m a n s 17. I t is c o m m o n l y f o u n d in tr o p ic a l c o u n t r i e s , s p e c i a l l y i n u n d e r d e v e l o p e d o n e s w h e r e s a n i t a t i o n a n d h y g i e n e a r e d e f i c i e n t 1.
It is b e l i e v e d t h a t 2 t o 5 0 % o f t h e w o r l d ’s p o p u l a t i o n a n d 1 2 . 1 % o f C o l o m b i a p o p u l a t i o n a c c o r d i n g t o t h e s e c o n d C o l o m b i a n N a t i o n a l M o r b i d it y S u r v e y is i n f e c t e d b y E n t a m o e b a h i s t o i y t i c a i . T h e p a r a s i t e c o l o n i s e s t h e i n t e s t i n a l t r a c t a n d f o r m h e r e it s p r e a d s t o o t h e r o r g a n s , d e p e n d i n g o n i t s i n v a s i v e c a p a c i t i e s - 8.
A m o e b i c i n f e c t i o n is c o n s i d e r e d t o b e t h i r d m o s t i m p o r t a n t c a u s e o f p a r a s i t e - r e l a t e d d e a t h s i n t h e w o r l d , a f t e r m a l a r i a a n d s c h i s t o s o m i a s i s T h e m o s t f r e q u e n t e x t r a i n t e s t i n a l c o m p l i c a t i o n o f a m o e b i c in f e c t i o n is t h e i n v a s i o n o f t h e l i v e r b y t h e p a r a s i t e , a c o n d i t i o n k n o w n a s a m o e b i c l i v e r a b s c e s s .
I n s t i t u t o N a c i o n a l d e S a l u d ( I N S ) a n d I n s t i t u t o C o l o m b i a n o
d e M e d i c i n a T r o p i c a l , M e d e l l í n , C o l o m b i a .
A d d re s s to: D r . M a r c o s I. R e s t r e p o , I n s t i t u t o C o l o m b i a n o d e
M e d i c i n a T r o p i c a l . P O B o x 5 2 1 6 2 , i M e d e l l í n , C o l o m b i a .
F a x ( 5 7 4 ) 2 6 2 - 5 5 0 8 .
R e c e b i d o p a r a p u b l i c a c ã o e m 2 0 / 0 2 / 9 5 .
T h e d i a g n o s i s o f a m o e b i c a b c e s s is s u g g e s t e d b y c l i n i c a i f e a t u r e s , b u t f u r t h e r p a r a c l i n i c t e s t s a r e r e q u i r e d i n o r d e r t o i d e n t i f y t h e l e s i o n i n t h e l i v e r : U l t r a s o n o g r a p h y , C o m p u t a r i s e d T o m o g r a p h y , I s o t o p i c S c a n , M a g n e t i c R e s o n a n c e I m a g i n g , d i a g n o s t i c a s p i r a t i o n , l i v e r b i o p s y a n d s u r g i c a l e x p l o r a t i n g a r e e m p l o y e d . L i v e r b i o p s y a n d d i a g n o s t i c a s p i r a t i o n a r e , h o w e v e r , t h e m e t h o d s t h a t a l l o w i d e n t i f i c a t i o n o f E . h i s t o i y t i c a i n t h e n e c r o t i c m a t e r i a l o f t h e a b s c e s s o r i n l i v e r t i s s u e J I0. T h i s m e t h o d is t h e m o s t s p e c i f i c o f a l i a n d p r o v i d e s a d i f f e r e n t i a l d i a g n o s i s w i t h p y o g e n i c l i v e r a b s c e s s , a c o n d i t i o n w h i c h r e q u i r e s c u l t u r e d i d e n t i f i c a t i o n o f t h e c a u s a t i v e b a c t é r i a 2. S i n c e t h e i d e n t i f i c a t i o n o f E. h is to iy ti c a is f e a s i b l e o n l y i n v e r y f e w c a s e , s e r o l o g i c a l t e c h n i q u e s t h a t c o u l d h e l p i n t h e d i a g n o s i s o f a m o e b i c l i v e r a b s c e s s h a v e b e e n i m p l e m e n t e d . T h e y a li e v a i u a t e t h e i n d i v i d u a T s i m m u n o l o g i c a l r e s p o n s e d e t e c t i n g c i r c u l a t i n g i m m u n e c o m p l e x e s o r d e t e c t i n g a n t i b o d i e s i n t h e s e r u m b y a d i v e r s i t y o f s e r o l o g i c a l t e s t s ' 718.
R e s tr e p o M I, R e s tr e p o Z , V il la r e a l CLE, A g u i r r e A , R e s tr e p o M . D i a g n o s t í c te s ts f o r a m o e b i c lit>er a b scess: c o m p a r i s o n o f e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y (E L IS A ) a n d c o u n t e r i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s (C IE). R e v is ta d a S o c i e d a d e B r a s i le i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 2 7 - 3 2 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .
M A T E R I A L A N D M E T H O D S
S t u d y p o p u l a t i o n . T h i s p o p u l a t i o n w a s c o m p o s e d b y 1 1 0 p a t i e n t s w h i c h w e r e d i s t r i b u t e d i n 3 g r o u p s a s f o l l o w s :
a ) 3 0 p a t i e n t s w i t h s y m p t o m a t i c i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s w i t h o u t a c u t e d y s e n t e r y , a li c o n f i r m e d b y t h e p r e s e n c e o f E. h is to ly tic a c y s t s o r t r o p h o z o i t e s i n m i c r o s c o p i c a l s t o o l e x a m i n a t i o n .
b ) 5 0 c o n t r o l p a t i e n t s , a y m p t o m a t i c p r e s u m a b l y h e a l t h y p e r s o n s ; w i t h n o r e c e n t o r p a s t m e d i c a i h i s t o r y o f a m o e b i c i n f e c t i o n i n t h e l a s t 2 y e a r s , a n d 3 n e g a t i v e s t o o l e x a m i n a t i o n o n 3 d i f f e r e n t d a y s .
c ) 3 0 p a t i e n t s w i t h s u s p e c t e d a m o e b i c l i v e r a b s c e s s a s s u g g e s t e d b y c l i n i c a i f e a t u r e s a n d u l t r a s o n o g r a p h í c f i n d i n g s .
B l o o d s a m p l e s w e r e o b t a n i d e f r o m a li p a t i e n t s i n l O m l t u b e s w i t h n o a n t i c o a g u l a n t , t o o b t a i n s e r u m a n d t h i s w a s s t o r e d a t - 2 0 ° C u n t i l s e r o l o g i c a l t e s t i n g .
C IE t e c h n i q u e . T h i s H M 1 c l o n e o f E. h i s t o l y t i c a s t r a i n ( o b t a i n e d f r o m I n s t i t u o N a c i o n a l d e S a l u d - I N S , B o g o t á , C o l o m b i a ) w a s c u l t u r e d i n t h e a x e n i c B I S - 3 3 m e d i u m o f D i a m o n d ' , a n d t h e n w e o b t a i n e d a p u r i f i e d a n t i g e n a s d e s c r i b e d b y G a n d h i e t a l '\ T h e C I E t e s t u s e d p u r i f i e d a n t i g e n o f E. h is to ly tic a p l a c e d i n t h e r i g h c o l u m n w e l l s a n d p r o b l e m s e r u m i n t h e l e f t c o l u m n w e l l s . E l e c t r o p h o r e s i s w a s r u n i n b a r b i t a l b u f f e r ( p H 8 . 6 ) f o r 4 5 m i n i n a c h a m b e r a t a c o n s t a n t v o l t a g e o f 1 1 0 t o 1 4 0 v o l t s a n d 4 t o 8 m i l l i a m p e r s . T h e s l i d e w a s i n c u b a t e d a t 3 7 ° C u n t i l c o m p l e t e l y d r y . T h e p r e s e n c e o f a p r e c i p i t i n l i n e b e t w e e n t h e a n t i g e n a n d s e r u m w ?e l l s w a s i n t e r p r e t e d a s a p o s i t i v e r e a c t i o n 11.
E LISA t e c h n i q u e . T h e a n t i g e n w a s p r e p a r e d f r o m c u l t u r e s o f E. h is to ly ti c a c l o n e s t r a i n H M 1 , g r o w n a x e n i c a l l y ' m e d i u m T Y I S - 3 3 . H a r v e s t e d t r o p h o z o i t e s w e r e w a s h e d 3 t i m e s w i t h s a l i n e . T h e n w e a p p l i e d t h e m e t h o d r e c o m m e n d e d b y G a n d h i e t a l ú t o o b t a i n t h e a n t i g e n . T h e t r o p h o z o i t e s w e r e f r o z e n o n c e a n d t h a w e d , s o n i c a t e d f o r 5 m i n u t e s a t 2 0 k i l o c y c l e s . F i n a l l y c e n t r i f u g e d a t 1 0 . 0 0 0 x g f o r 3 0 m i n u t e s a t 4 ° C . W e u s e d t h e c l e a r s u p e r n a t a n t a s a n t i g e n w i t h a p u r e p r o t e i n c o n c e n t r a t i o n o f 6 m g / m l . T h i s a n t i g e n w a s d i s t r i b u t e d i n 1 0 0 m i c r o l i t e r a l i q u o t s t o e a c h w e l l o f t h e p o l y s t u r e n e m i c r o p l a t e s ( D y n a t e c h ( R ) ) , i n c u b a t e d o v e r n i g h t a t 4 o C i n a m o i s t
c h a m b e r . T h e m i c r o p l a t e s w a s r i n s e d w i t h T w e e n - 2 0 i n P B S f o r 3 m i n u t e s , t h r e e c o n s e c u t i v e t i m e s ; 2 0 0 m i c r o l i t e r o f c a s e i n ( w / v ) i n P B S w e r e a d d e d t o e a c h w e l l a n d a f t e r w a r d s t h e m i c r o p l a t e w a s i n c u b a t e d f o r 1 h o u r a t 3 7 ° C i n a m o i s t c h a m b e r . T h e p l a t e w a s r i n s e d a g a i n w i t h P B S - T w e e n 2 0 b e f o r e a d d i n g 1 0 0 m i c r o l i t e r s o f s e r u m d i l u t e d 1 / 1 0 0 i n P B S - T w e e n 2 0 ; t h e n i n c u b a t e d f o r 1 h o u r a t 3 7 ° C a n d r i n s e d a g a i n . N e x t s t e p , 1 0 0 m i c r o l i t e r s o f c o n j u g a t e a n t i - h u m a n I g G p e r o x i d a s e ( S i g m a ( R ) ) w a s u s e d a t a d i l u t i o n o f 1 : 4 0 0 i n 0 . 1 M - P B S , p H 7 . 2 . T h e m i c r o p l a t e w a s i n c u b a t e d a t 3 7 “C i n a m o i s t c h a m b e r f o r 1 h o u r . F i n a l l y , 1 0 0 m i c r o l i t e r s o f s u b s t r a t e ( 0 . 4 m g o f o - p h e n y l e n e d i a m i n e p e r m l o f 0 . 1 M p h o s p h a t e c i t r a t e b u f f e r , p H 5 . 0 ) w e r e a d d e d t o e a c h w e l l l e f t t o r e s t f o r 2 0 m i n u t e s i n t h e d a r k . T h e e n z y m e r e a c t i o n w a s s t o p p e d b y t h e a d d i t i o n o f 5 0 m i c r o l i t e r s o f H C L 2 . 5 N .
R e a d i n g s w e r e p e r f o r m e d w i t h a 4 9 2 n m f i l t e r t o d e t e r m i n e 2 o p t i c a l d e n s i t i e s ( O . D . ) p e r p a r t i e n t a n d f r o m t h e s e , a n a v e r a g e o f O . D . v a l u e s w e r e c a l c u l a t e d : t h r e e n e g a t i v e a n d t w o p o s i t i v e c o n t r o l s e r a w e r e a d d i t i o n a l l y p r o c e s s e d ' H.
W e a r e u s i n g a s t h e G o l d S t a n d a r d s t h e p a r a s i t o l o g i c a l d i a g n o s i s o f i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s i n t h e s t o o l s a n d u l t r a s o n o g r a p h í c f i n d i g n s f o r a m o e b i c l i v e r a b s c e s s .
T h e a v e r a g e c u t - o f f p o i n t o f t h e E L IS A t e c h n i q u e w a s 0 . 1 5 6 , t h e a b s o r b a n c e r e a d i n g n e e d e d t o d i f f e r e n c i a t e b e t w e e n p o s i t i v e a n d n e g a t i v e s a m p l e s w a s e s t a b l i s h e d b y c a l c u l a t i n g t h e m e a n v a l u e p l u s S . D . ( p < 0 . 0 5 ) o f t h e a b s o r b a n c e v a l u e s o f s a m p l e s o f h e a l t h y p a t i e n t s , a m o e b i a s i s i n t e s t i n a l p a t i e n t a n d t h o s e p a t i e n t s w i t h a m o e b i c l i v e r a b s c e s s .
D e t e r m i n a t i o n o f t e s t p a r a m e t e r s w e r e d e t e r m i n e d u s i n g a 2 x 2 c o n t i n g e n c y t a b l e 9 t h a t i n c l u d e d t h e f o l l o w i n g c a l c u l a t i o n s : f o r s e n s i t i v i t y ( S ) : a / a + c ; a ) t r u e p o s i t i v e s , is t h e n u m b e r o f p a t i e n t s w i t h p a r a s i t o l o g i c a l d i a g n o s i s o f i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s a n d p o s i t i v e s e r o l o g i c a l t e s t ; b ) f a l s e p o s i t i v e s c o r r e s p o n d e d t o h e a l t h y a s y m p t o m a t i c p e r s o n s w i t h o u t p a r a s i t e s i n t h e s t o o l s ( c o n t r o l g r o u p ) b u t p o s i t i v e s e r o l o g i c a l t e s t . F o r s p e c i f i c i t y ( E ) : d / b + d ; d ) t r u e n e g a t i v e s , is h e a l t h y p e r s o n s w i t h o u t a m o e b i a s i s a n d n e g a t i v e s e r o l o g i c a l t e s t ; a n d c ) f a l s e n e g a t i v e s , t h e p o a t i e n t s w i t h i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s a n d n e g a t i v e s e r o l o g i c a l t e s t . F o r p o s i t i v e p r e d i c t i v e v a l u e ( P P V ) : a / a + b a n d n e g a t i v e
R estrepo M I, R e str e p o Z , V illa r e a l CLE, A g u i i r e A , R e s tr e p o M . D i a g n o s t i c te sts f o r a m o e b i c li v e r a b sc e ss:
c o m p a ris o n o f e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y (E L IS A ) a n d c o u n t e r i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s (C IE ). R evista d a S o c ie d a d e B r a s i le i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 2 7 - 3 2 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .
p r e d i c t i v e v a l u e ( N P V ) : d / c + d . T h e c a l c u l a t i o n w a s a p p l i e d f o r b o t h E L I S A a n d C I E t e s t s .
R E S U L T S
F r o m t h e 3 0 p a t i e n t s w i t h i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s , t h r e e p r e s e n t e d p o s i t i v e E L I S A te s t, b u t a li o f t h e m w e r e n e g a t i v e i n t h e C I E te s t ( T a b l e s 1 a n d 2 ) . N o n e o f t h e 5 0 s e r a f r o m c o n t r o l p a t i e n t s g a v e p o s i t i v e r e s u l t s i n t h e t w o te s t s u s e d ( T a b l e s 1 a n d 2 ) .
I n p a t i e n t s w i t h i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s , t h e s e n s it i v i t y o f t h e E L I S A t e c h n i q u e w a s o n l y
1 0 % b u t i t s s p e c i f i c i t y w a s 1 0 0 % ( T a b l e 3 ) . T h e C I E t e s t w a s n e v e r f o u n d t o b e p o s i t i v e i n t h i s c l i n i c a i f o r m o f a m o e b i a s i s . O n l y 3 s e r a f r o m p a t i e n t s w i t h s y m p t o m a t i c i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s w i t h o u t d y s e n t e r y w e r e p o s i t i v e b y E L I S A . T h e p r e d i c t i v e v a l u e s o f p o s i t i v e t e s t w e r e 1 0 0 % f o r E L IS A a n d 0 % f o r C I E . T h e p r e d i c t i v e v a l u e s o f n e g a t i v e t e s t w a s 6 5 % f o r E L IS A a n d 6 2 . 5 % f o r C I E ( T a b l e 3 ) .
I n t h e g r o u p o f p a t i e n t s w i t h l i v e r a b s c e s s , 2 7 ( 9 0 % ) o u t o f 3 0 w e r e p o s i t i v e b y E L IS A a n d 2 0 ( 6 6 . 6 % ) b y C I E ( T a b l e s 1 a n d 2 ) . T h e
T a b le 1 - R e s u l t s o f t h e E I .I S A t e s t i n t h e d i a g n o s i s o f l i v e r a b s c e s s a n d i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s .
R e s u l t s
C l i n i c a i f o r m N r o f p a t i e n t s n e g a t i v e c a s e s p o s i t i v e c a s e s
n % n %
I n t e s t i n a l a m o e b i a s i s 3 0 2 7 9 0 3 1 0
L i v e r a b s c e s s 3 0 2 1 0 2 7 9 0
C o n t r o l p a t i e n t s 5 0 5 0 1 0 0 0 0
T o t a l 1 1 0 8 0 - 3 0
T a b le 2 - R e s u lt s o f t h e C I E t e s t i n t h e d i a g n o s i s o f l i v e r a b s c e s s, i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s a n d p e r s o n s w i t h o u t a m o e b i c i n f e c t i o n, i n C o l o m b i a .
C l i n i c a i f o r m
R e s u l t s N r o f
c a s e s
n e g a t i v e
n % n
p o s i t i v e %
I n t e s t i n a l a m o e b i a s i s 3 0 3 0 1 0 0 , 0 0 . 0 0 . 0
L i v e r a b s c e s s 3 0 1 0 3 3 . 3 2 0 . 0 6 6 . 6
C o n t r o l p a t i e n t s 5 0 5 0 1 0 0 . 0 0 . 0 0 . 0
T o t a l 1 0 0 9 0 - 2 0
s e n s i t i v i t y f o r E L I S A a n d C I E t e s t s w e r e 1 0 0 % a n d 6 6% r e s p e c t i v e l y ( T a b l e 3 ). T h e s p e c i f i c i t y a n d t h e p r e d i c t i v e v a l u e o f p o s i t i v e t e s t s w i t h b o th r e a c t i o n s w e r e 1 0 0 % . T h e p r e d i c i t i v e v a lu e o f n e g a t i v e t e s t w a s 1 0 0 % f o r E L I S A a n d
83% f o r C I E ( T a b le 3 ).
D I S C U S S I O N
I n t h i s s t u d y , w e c o n f i r m e d t h e c l i n i c a i s u s p i c i o n o f e x t r a i n t e s t i n a l a m o e b i a s u s b y s e r o l o g i c a l t e s t s . I n d e e d , a l i c a s e s o f a m o e b i c l i v e r a b s c e s s c o u l d b e d e t e c t e d b y t h e p r e s e n c e o f a n t i b o d i e s a g a i n s t E. h is to ly tic a b y
T a b l e 3 - V a l u e o f v a r o u s t e s t s a c c o r d i n g t o t h e d i a g ) i o s i s .
V a l u e s
C l i n i c a i f o r m
A L A * I A * *
E L I S A C I E E L I S A C I E
S e n s i t i v i t y 9 0 . 0 6 6 . 7 1 0 . 0 0 . 0
E s p e c i f i c i t y 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0
P r e d i c t i v e v a l u e o f p o s i t i v i t e t e s t 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 1 0 0 . 0 P r e d i c t i v e v a l u e o f n e g a t i v e t e s t 9 4 . 3 8 3 - 3 6 5 . 0 6 2 . 5 p < 0 . 0 5
• A L A * a m o e b i c l i v e r a b s c e s s •* I A - i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s .
R e s tr e p o M I, R e s tr e p o Z , V il la r e a l C IE , A g u i r r e A , R e s tr e p o M . D i a g n o s t i c te s ts f o r a m o e b i c l i v e r a b scess: c o m p a r i s o n o f e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y (E L IS A ) a n d c o u n t e r i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s (C IE). R e v is ta d a S o c i e d a d e B r a s i le i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 2 7 - 3 2 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .
s h o w n b y H o c k e t a l 7. T h i s m e t h o d s h o w e d h i g h s e n s i t i v i t y a n d s p e c i f i c i t y i n t h o s e c a s e s w h e r e t h e p a r a s i t e w a s v e r y i n v a s i v e s u c h a s i n t e s t i n a l ( d y s e n t e r y ) o r l i v e r a m o e b i a s i s . T h e E L IS A w a s r e l i a b l e c o m p a r e d w i t h h e a l t h y C o n t r o l s .
A n a l y z i n g t h e E L IS A r e s u l t s i n t h e d i a g n o s i s o f 3 0 p a t i e n t s w i t h l i v e r a b s c e s s , w e f o u n d t h a t o n l y 3 p a t i e n t s w e r e n e g a t i v e b y t h i s s e r o l o g i c a l t e s t . R e v i e w i n g t h e s e c a s e s w e c o n c l u d e d t h a t t w o o f t h e p a t i e n t s h a d l i v e r a b s c e s s e s s e c o n d a r y t o s t a b b i n g i n j u r i e s , w h i c h r e s p o n d e d f a v o r a b l y t o c o m b i n e d a n t i m i c r o b i a l t h e r a p y ( a g a i n s t g r a m p o s i t i v e , g r a m n e g a t i v e a n d a n a e r o b i c b a c t é r i a ) a n d s u r g i c a l d r a i n a g e . T h e t h i r d p a t i e n t d i d n o t r e s p o n d t o t h e a n t i - a m o e b i c t h e r a p y , t h e n a s u r g i c a l d r a i n a g e w a s p e r f o r m e d a n d a p p r o p r i a t e a n t i b i o t i c t r e a t m e n t w a s i n d i c a t e d , s i n c e S t a p h y l o c o c c u s a u r e u s w a s i s o l a t e d f r o m t h e p u r u l e n t m a t e r i a l . T h u s , t h e 3 p a t i e n t s w h o w e r e n e g a t i v e b y E L I S A a n d C I E w e r e a l s o n e g a t i v e f o r a m o e b i c l i v e r a b s c e s s , a n d a c t u a l l y h a d a p y o g e n i c l i v e r a b s c e s s . O n t h e o t h e r h a n d , 3 p a t i e n t s w i t h i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s a n d w i t h o u t l i v e r a b s c e s s w e r e p o s i t i v e b y E L I S A b u t n e g a t i v e b y C I E . A l t h o u g h o u r s t u d y d i d n o t t a k e i n c o n s i d e r a t i o n t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n d y s e n t e r i c a n d a c u t e f o r m o f i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s , t h e s e r o p o s i t i v i t y o n E L I S A t e s t c o u l d i n d i c a t e a t i s s s e u i n v a s i o n w i t h E. h is to iy tic a ''. I n f a c t , m o s t o f o u r p a t i e n t s w i t h o u t c l i n i c a i e v i d e n c e o f l i v e r a b s c e s s h a d a c h r o n i c f o r m o f i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s .
T h e s p e c i f i c i t y o f E L IS A t e s t i n g i n t h e d i a g n o s i s o f a m o e b i c l i v e r a b s c e s s w a s s u p p o r t e d b y t h e f a c t t h a t a m o e b i c a n t i b o d i e s w e r e a b s e n t i n s e r u m f r o m h e a l t h y C o n t r o l s 7 11 1 2 H o w e v e r s o m e t r o u b l e s m a y a r i s e w h e n t h e o p t i c a l d e n s i t i c s a r e i n t h e l i m i t o f t h e c u t - o f f ( + 1 S D ) . L o n g i t u d i n a l s t u d i e s a r e n e e d e d t o a s s e s t h e a n t i b o d y r e s p o n s e s v a r i a b i l i t y a l o n g t h e e v o l u t i o n o f t h e d i s e a s e . T h i s c o u l d a l s o a l l o w a b e l l e r t h e r a p e u t í c a l f o l l o w - u p .
T h e C I E f o r d e t e c t i o n o f a n t i a m o e b i c a n t i b o d i e s i n t h e p a t i e n t s s e r a h a s b e e n c a r r i e d o u t a n d c o r r e l a t e d w i t h t h e r o u t i n e d i a n o s t i c m i c r o s c o p i c e x a m i n a t i o n o f s t o o l s a n d p a s s a m p l e s f r o m p a t i e n t s w i t h a c h a r a s c t e r i s t i c c l i n i c a i c a s e . I n t h e 3 0 p a t i e n t s w i t h l i v e r a b s c e s s e v a l u a t e d b y C I E t e s t , 7 c a s e s w e r e n e g a t i v e . T h o s e c a s e s h a d c l i n i c a i a n d
u l t r a s o n o g r a p h i c f i n d i n g s o f l i v e r a b s c e s s , o f w h i c h j u s t 3 w e r e t h e p a t i e n t s m e n t i o n e d a b o v e ( n o n - a m o e b i c l i v e r a b s c e s s ) a n d 4 c a s e s w e r e f a l s e - n e g a t i v e . T h e s e 4 p a t i e n t s d i d r e s p o n d a n d i m p r o v e a f t e r a n t i - a m o e b i c t r e a t m e n t .
O u r r e s u l t s a r e i n a g r e e m e n t w i t h o f B a p a t a n d B h a v e 1, w h o f o u n d i n 2 0 o f 3 0 p r o v e d c a s e s o f A L A a s e r o p o s i t i v i t y b y C I E . M o r e o v e r , S a m r e j r o n g r o j e t a l 11 c o m p a r e d C I E a n d E L I S A f o r E. h is t o i y tic a a n t i b o d i e s d e t e r m i n a t i o n in p a t i e n t s w i t h a m o e b i a s i s a n d r e p o r t e d a s e n s i t i v i t y o f 9 3 - 5 % a n d 1 0 0 % r e s p e c t i v e l y . S a t h a r e t a l 12 e v a l u a t e d t h e E L IS A t e s t f o r s e r o d i a g n o s i s o f a m o e b i c l i v e r a b s c e s s , a n d f o u n d t h e p r e s e n c e o f I g G a n t i b o d i e s w i t h a s e n s i t i v i t y o f 9 9 % . S i m i l a r r e s u l t s w e r e o b t a i n e d b y S h e t t y e r a l lH. F i n a l l y , H o c k e r a l 7, c o m p a r i n g b o t h t e s t s f o u n d E L I S A m o r e s e n s i t i v e t h a n C I E ( 9 7 . 4 % v s 8 8 . 5 % r e s p e c t i v e l y ) . A l t o g e t h e r , t h e s e r e s u t l s s h o w t h a t E L I S A i s m o r e s e n s i t i v e t h a n C I E : a n d t h a t b o t h t e s t s a r e h i g h l y s p e c i f i c f o r a m o e b i c l i v e r a b s c e s s .
T h e g o l d s t a n d a r f o r t h e d i a g n o s i s o f A L A is t h e l i v e r b i o p s y ’ . H o w e v e r t h i s p r o c e d u r e is n o t c u r r e n t l y d o n e i n e v e r y c a s e . O t h e r w i s e , t h e p e r c e n t a g e o f p o s i t i v e l y f o r t r o f o z o i t e s in t h e a m a l y s i s o f p u s i n t h e l i v e r a b s c e s s i s l o w . T h e r e f o r e t h e E. h i s t o i y t i c a a n t i b o d i e s d e t e r m i n a t i o n b y E L I S A i s a g o o d d i a g n o s t i c t o o l i n A L A , a s a n o n - i n v a s i v e a n d c o s t - e f f e c t i v e n e s s p r o c e d u r e .
I n c o n c l u s i o n , t h e d i a g n o s i s o f l i v e r a m o e b i a s i s i n t r o p i c a l c o u n t r i e s c a n b e a t t e m p t e d b y t h e s e a r c h o f E. h is t o i y tic a a n t i b o d i e s b y b o t h E L IS A a n d C I E t e c h n i q u e s . C u r r e n t l y w e a r e r o u t i n e l y u s i n g E L IS A t o c o n f i r m A L A d i a g n o s i s . T h i s w i l l a l l o w u s t o s t u d y t h e s e r o p r e v a l e n c e a s w e l l a s t h e r e l i a b i l i t y o f t h i s t e s t i n t h e r a p e u t i c a l f o l l o w - u p s . O t h e r c a s e s o f l i v e r a b s c e s s s h o u l d b e i n c l u d e d ( e . g . h y d a t i d c y s t , m e t a s t a t i c o r h e p a t i c c a r c i n o m a s ) , a s w e l l a s o t h e r p a r a s i t i c d i s e a s e s , i n o r d e r t o a s s e s t h e p o s s i b i l i t y o f c r o s s - r e a c t i o n w i t h d i s e a s e s c l i n i c a l l y s i m i l a r t o e x t r a - i n t e s t i n a l a m o e b i a s i s .
R E S U M O
O a b s c e s s o h e p á t i c o é a c o m p l i c a ç ã o m a i s
f r e q ü e n t e d a a m e b í a s e i n t e s t in a l : o s e u d i a g n ó t i c o s u g e r e - s e p e l o q u a d r o c lí n ic o , m a s é c o n f i r m a d o p e l o s e s t u d o s p a r a c l í n i c o s . P a r a c o n f i r m a r o
d i a g n ó s t i c o p r e c i s a - s e i d e n t i f i c a r a E . h i s t o i y t i c a , o
Restrepo M I, R e s tr e p o Z , V illa r e a l CLE, A g u i r r e A , R e s tr e p o M . D i a g n o s t i c te sts f o r a m o e b i c li v e r a b sc e ss: c o m p a ris o n o f e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y (E L IS A ) a n d c o u n t e r i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s (C IE ). R evista d a S o c i e d a d e B r a s i le i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 2 7 - 3 2 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .
q u e é a p e n a s p o s s ív e l e m m u i t o p o u c o s c a s o s . A s
p r o v a s s o r o l ô g i c a s m e l h o r a m n o t a d a m e n t e o
d ia g n ó s tic o d a s c o m p l i c a ç õ e s s e v e r a s d a a m e b ía s e . E m n o sso e s t u d o c o m p a r a m o s o te s te d e E L IS A e a
C o n tr a im u n o e le tr o fo r e s e (C IE ). A m b a s a s t é c n i c a s f o r a m u t i l i z a d a s p a r a d e t e c t a r a n t i c o i p o s c o n tr a
a m e b a e m 5 0 p a c i e n t e s s e m a m e b í a s e , 3 0 p a c i e n t e s co m a b sc e s so h e p á t i c o e 3 0 c o m a m e b í a s e i n t e s t in a l . Todos o s s o r o s d o s p a c i e n t e s s e m a m e b í a s e f o r a m
n e g a tiv o s p o r a m b a s a s t é c n i c a s . Q u a n d o a n a lis a m o s o s s o r o s d o s p a c i e n t e s c o m a m e b í a s e
in te stin a l, e n c o n t r o u - s e q u e 1 0 % d e s te s , f o r a m p o sitivo s p a r a EL ISA , e n q u a n t o q u e n e n h u m o f o i
p a r a CIE. N o s s o r o s d o s p a c i e n t e s c o m a b s c e s s o h ep átic o, e n c o n t r o u - s e u m a p o s i t i v i d a d e d e 9 0 %
p a r a ELISA e 6 6 .6 % p a r a CIE. E ste s r e s u lta d o s m o s tr a m q u e o t e s te d e E L IS A f o i d e m a i o r
s e n s ib il id a d e (1 0 0 % i d e s e n s i b i l i d a d e ) n o d ia g n ó s tic o d o a b s c e s s o h e p á t i c o a m e b i a n o , q u a n d o c o m p a r a d o c o m a C o n t r a i m u n o e l e t r o f o r e s e
(66.6% ) .
P a la v r a s -c h a v e s : A b s c e s s o h e p á ti c o a m e b i a n o . D ia g n ó stic o , EL ISA . CIE.
A C K N O W L E D G M E N T S
W e t h a n k s C o r p o r a c i ó n p a r a I n v e s t i g a c i o n e s B i o ló g ic a s ( C I B ) , I n s t i t u t o C o l o m b i a n o d e M e d i c in a T r o p i c a l ( I C M T ) , M e d e l l í n , I n s t i t u t o N a c i o n a l d e S a l u d ( I N S ) , i n B o g o t á a n d U n i v e r s i d a d d e l o s A n d e s i n B o g o t á . W e a r e a ls o i n d e b t e d t o C a r l o s B e r a n c u r M D , N e l s o n R a m ír e z M D , S a n t i a g o N i c h o l l s M D , F e l i p e G u h l P h D , L u z A c o s t a L ic a n d R o s a l b a B e t a n c u r L ic , f o r t h e i r i n t e r e s t a n d c o o p e r a t i o n in t h is s t u d y .
R E F E R E N C E S
1 . B a p a t M M , B h a v e G G . C o u n t e r -i m m u n o e l e c t r o p h o r e s -i s -i n t h e -i m m u n o d -i a g n o s -i s o f a m o e b i a s i s . J o u r n a l o f P o s t g r a d u a t e M e d i c i n e 3 6 : 1 2 4 - 1 2 7 , 1 9 9 0 .
2 . B a r n e s PF, C o c k K M , R e y n o l d s T N , R a l i s P W . A c o m p a r i s o n o f a m e b i c a n d p y o g e n i c a b s c e s s o f t h e l i v e r . M e d i c i n e ( B a l t i m o r e ) 6 6 : 4 7 2 - 4 8 3 , 1 9 8 7 . 3 . B o t e r o D , R e s t r e p o M . P a r a s i t o s i s h u m a n a s . 2 a
e d i ç ã o . C I B , M e d e l l í n , p . 2 4 - 5 7 , 1 9 9 2 .
4. D i a m o n d L S , H a r l o w D R , C u n n i c k C C . A n e w m e d i u m f o r t h e a x e n i c c u l t i v a t i o n o f E n t a m o e b a h is to iy tic a a n d o t h e r E n t a m o e b a . T r a n s a c t i o n o f t h e R o y a l S o c i e t y o f T r o p i c a l M e d i c i n e a n d H y g i e n e 7 2 : 4 3 1 - 4 3 3 , 1 9 8 8 .
5 . F r e y C h F , Z h u Y , S u z u k i M , I s a j i S . L i v e r a b s c e s s . S u r g i c a l C l i n i c a i o f N o r t h A m e r i c a 6 9 : 2 5 9 - 2 7 1 , 1 9 8 9 .
6 . G h a n d i B M , I r s h a d M , C h a w l a T C , T a n d o n B N . A m e b i c l i v e r a b s c e s s a n d c i r c u l a t i n g i m m u n e c o m p l e x e s o f E n t a m o e b a h is to i y ti c a p r o t e i n s . T h e A m e r i c a n J o u r n a l o f T r o p i c a l M e d i c i n e a n d H y g i e n e 3 9 : 4 4 0 - 4 4 4 , 1 9 8 8 .
7 . H o c k G M , F o o n K L , C h u e n H L , C h o o N G , S i n g h M . a c o m p a r i s o n o f t h e E L I S A w i t h o t h e r s e r o l o g i c a l t e s t s i n t h e s e r o d i a g n o s i s o f a m o e b i a s i s . S o u t h e a s t A s i a n J o u r n a l T r o p i c a l M e d i c i n e a n d P u b l i c H e a l t h 2 0 : 3 9 9 - 4 0 5 , 1 9 8 9 .
8 . M e h l o t r a R K . E n t a m o e b a h i s t o i y t i c a: f r o m i n t e s t i n e t o l i v e r . P a r a s i t o l o g y T o d a y 4 : 2 3 5 , 1 9 8 8 . 9 . R i e g e l m a n R K , H i r s c h R P C ó m o e s t u d i a r u n
e s t ú d i o y p r o b a r u n a p r u e b a : l e c t u r a c r í t i c a d e l a l i t e r a t u r a m é d i c a . O r g a n i z a c i ó n P a n a m e r i c a n a d e l a S a l u d . P u b l i c a c i ó n C i e n t í f i c a n “ 5 3 1 , p . 1 1 2 - 1 2 1 , 1 9 9 2 .
1 0 . R u s t i g i A K , R i c h t e r J M . P y o g e n i c a n d a m e b i c l i v e r a b s c e s s . M e d i c a i C l i n i c o f N o r t h A m e r i c a 7 3 : 8 4 7 -8 5 7 , 1 9 -8 9 .
1 1 . S a m r e j r o n g r o j P, T h a r a v a n i j S . A s s e s m e n t o f v a l i d i t y o f c o u n t e r i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s a n d E L I S A i n t h e r o u t i n e d i a g n o s i s o f a m o e b i a s i s . J o u r n a l o f T r o p i c a l M e d i c i n e a n d P u b l i c H e a l t h
1 6 : 3 6 5 - 3 7 0 , 1 9 8 5 .
1 2 . S a t h a r M A , S i m j e e A R , N e l J D , B r e d e n k a m p B L , G a t h i r a m V , J a c k s o n T F . E v a l u a t i o n o f a n e n z y m e -l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y i n t h e s e r o d i a g n o s i s o f a m o e b i c l i v e r a b s c e s s . S o u t h A f r i c a n M e d i c a i J o u r n a l 7 4 : 6 2 5 - 6 2 8 , 1 9 8 8 .
1 3 - S e p u l v e d a B , A u b a n e l M , L a n d a L , V e l á s q u e z G . A v a n c e s e n l a t é c n i c a d e c o n t r a i m m u n o -e l -e c t r o f o r -e s i s p a r a -e l -e s t ú d i o s -e r o l ó g i c o d -e la a m i b i a s i s . A r c h i v o s d e I n v e s t i g a c i ó n M é d i c a 3 : 3 6 3 - 3 7 0 , 1 9 7 2 .
1 4 . S h e t t y N , N a g p a l S , S u b b a R a o P V , S c h o r o e d e r H . D e t e c t i o n o f I g G , I g A , I g M a n d I g E a n t i b o d i e s i n i n v a s i v e a m o e b i a s i s i n e n d e m i c a r e a s . S c a n d i n a v i a n J o u r n a l o f I n f e c t i o u s D i s e a s e s 2 2 : 4 8 5 - 4 9 1 , 1 9 9 0 .
1 5 . V o l l e r A , B i d w e l l D E , B a r t l e t t A . E n z y m e i m m u n o a s s a y s i n d i a g n o s t i c m e d i c i n e . T h e o r y a n d p r a c t i c e . B u l l e t i n o f t h e W o r l d H e a l t h O r g a n i z a t i o n 5 3 : 5 5 - 6 5 , 1 9 7 6 .
1 6 . W a l s h J A . P r o b l e m s i n t h e r e c o g n i t i o n a n d d i a g n o s i s o f a m o e b i a s i s : e s t i m a t i o n o f t h e g l o b a l m a g n i t u d e o f m o r b i d i t y a n d m o r t a l i t y . R e v i e w s o f I n f e c t i o u s D i s e a s e s 8 : 2 2 2 - 2 3 8 , 1 9 8 6 .
R e s tr e p o M I, R e s tr e p o Z , V il la r e a l CLE, A g u i r r e A , R e s tr e p o M , D i a g n o s t i c te s ts f o r a m o e b i c l i v e r a b sc e ss: c o m p a r i s o n o f e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y (E L IS A ) a n d c o u n t e r i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s (C IE ). R e v is ta d a S o c i e d a d e B r a s i le i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 2 7 - 3 2 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .
D i s e a s e s . G e n e v e , W o r l d H e a l t h O r g a n i z a t i o n , p . 1 6 - 1 7 , 1 9 8 7 .
1 8 . Y o u s s e f F G , M a n s o u r N S . E v a l u a t i o n o f e n z y m e -l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y ( E L I S A ) , i n d i r e c t h e m a g g l u t i n a t i o n ( I H A ) ,
c o u n t e r i m m u n o e l e c t r o p h o r e s i s ( C E I P ) a n d i m m u n o d i f u s i o n ( I D ) i n t h e s e r o d i a n g o s i s o f a m e b i a s i s . J o u r n a l o f t h e E g y p t i a n S o c i e t y o f P a r a s i t o l o g y 1 8 : 3 7 3 - 3 8 1 , 1 9 8 8 .
