R e v is ta d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 ( l ) : 5 - 9 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .
T H E I N F L U E N C E O F C D 4 + T C E L L S, H I V D I S E A S E S T A G E
A N D Z I D O V U D I N E O N H I V I S O L A T I O N I N B A H I A , B R A 2 I L
C arlos B rites, C élia P e d r o so , N a n e i S ilva , W arren D J o h n s o n J r a n d R o b erto B a d aró
H I V - l i s o l a tio n w a s a t t e m p t e d o n 7 2 i n d i v i d u a i s , i n c l u d i n g p e r s o n s w i t h k n o u m H I V i n f e c t i o n a n d f i v e w i t h o u t p r o v e n H I V i n f e c t i o n b u t w i t h i n d e t e r m i n a t e W e s te r n b lo t p a t t e r n s , a s w e ll a s o n l o w r i s k H I V s e r o n e g a t i v e p e r s o n s . T h e a h i l i t y to d e t e c t H IV -1 f r o r n c u l t u r e s u p e r n a t a n t b y p 2 4 a n t i g e n c a p t u r e a s s a y w a s e v a l u a t e d b y s e g r e g a t i n g p a t i e n t s b y a b s o l u t e C D 4 + c e ll c o u n t s , c l i n i c a i s t a g e o f d is e a s e , p 2 4 a n t i g e n e m i a a n d z i d o v u d i n e u s e . T h e l i k e l i h o o d o f a p 2 4 p o s i t i v e H I V c u l t u r e w a s h i g h e s t a m o n g p a t i e n t s w i th C D 4 + T -c e ll c o u n t s b e l o w 2 0 0 / u l a n d p a t i e n t s w i t h a d v a n c e d c l i n i c a i d is e a s e . U se o f z i d o v u d i n e d i d n o t a f f e c t t h e r a t e o f H I V p o s i t w i t y i n c u l t u r e s .
K e y - w o r d s : H IV . P 2 4 . V ir a l is o l a tio n . B r a z i l . C D 4 + T l y m p h o c y t e s .
T h e h u m a n i m m u n o d e f i c i e n c y v ir u s T y p e - 1 (H IV -1 ) h a s b e e n i s o l a t e d f r o m l y m p h n o d e s , p e r i p h e r a l b l o o d m o n o n u c l e a r c e lls (P B M C ), a n d o t h e r b o d y flu id s , f r o m p a t i e n t s w i t h H IV
i n f e c t i o n a n d / o r t h e a c q u i r e d
i m m u n o d e f i c i e n c y s y n d r o m e ( A I D S ) 18. D iffe re n t r a te s o f v ir u s i s o l a t i o n f r o m P B M C o f H IV -1 in f e c t e d p a t i e n t s h a v e b e e n r e p o r t e d , r a n g i n g f r o m 3 0 - 9 9 % '* 7 10 l2. R e c e n t m o d if ic a tio n s o f s t a n d a r d t e c h n i q u e s l e d t o t h e a b ility t o e s tim a te v ira l l o a d f r o m p l a s m a a n d P B M C o b t a i n e d f r o m p a t i e n t s w i t h d i f f e r e n t s ta g e s o f H IV -1 i n f e c t i o n 6 9. T h is m e t h o d is u s e d to in c r e a s e u n d e r s t a n d i n g o f H IV d i s e a s e p r o g r e s s io n a n d t o m o n i t o r t h e e f f e c t o f a n tiv ira l th e r a p y .
A s o f 1 9 9 3 o v e r 4 0 ,0 0 0 A ID S c a s e s h a v e b e e n r e p o r t e d in B r a z i l '\ T h is s t u d y w a s in i t i a t e d t o e v a l u a t e t h e q u a l i t a t i v e a n d q u a n tita tiv e H IV c u ltiv a tio n m e t h o d s a n d t h e e ffe c t o f p a t i e n t s ’ C D 4 + T - c e ll c o u n t , c lin ic a i s t a g e o f d i s e a s e , p 2 4 a n t i g e n e m i a a n d Z id o v u d in e u s e o n r e c o v e r i n g H IV .
L a b o ra tó rio d e R e tro v íru s . H o s p ita l U n iv e r s itá r io P ro f. E d ga rd S a ntos, U n iv e rs id a d e F e d e ra l d a B a hia , S a lv ad o r, BA, B razil, a n d D iv isio n o f I n te r n a tio n a l M e d ic in e , C o rn e ll U n iv e rsity M e d ic a i C o lle g e , N e w Y ork, NY, USA.
R e se a rc h s u p p o r te d b y g ra n ts A I2 6 5 0 6 a n d T W 0 0 0 1 8 fro m th e U n ite d S ta te s P u b lic H e a lth S e rv ic e .
A d d r e s s to c o r r e s p o n d e n c e . Dr. C . B rite s. L a b o ra tó rio d e R etrov írus/H U P E S /U F B A . R. J o ã o d a s B o ta s s /n , C a n e la , 4 0 1 1 0 -1 6 0 S alvador, BA, Brazil.
P h o n e : (5 5 7 1 ) 2 3 5 -4 8 6 6 , F a x (5 5 -7 1 ) 2 4 5 -7 1 1 0 . R e c e b id o p a ra p u b lic a ç ã o e m 0 8 /1 2 /9 4 .
M A T ER IA L A N D M E T H O D S
S t u d y P o p u l a t i o n . P a t i e n t s a t t e n d i n g t h e
A ID S c lin ic o f t h e F e d e r a l U n i v e r s ity o f B a h ia H o s p i t a l w e r e e l i g i b l e f o r t h e s t u d y . P B M C f r o m 7 2 i n d i v i d u a i s w e r e c u l t i v a t e d f o r H IV -1 i s o l a t i o n f r o m t h e f o l l o w i n g g r o u p s : a ) F ifty - o n e p a t i e n t s w i t h H IV -1 p o s i t i v e W e s t e r n b l o t ( W B ) ; b ) F i v e l o w - r i s k H I V - 1 - e n z y m e i m m u n o a s s a y CEIA) r e a c t i v e b l o o d d o n o r s w h o h a d a n i n d e t e r m i n a t e H IV -1 W B p a t t e r n ( p 2 4 b a n d o n ly ) ; a n d c ) T h r e e H IV -E IA a n d W B - s e r o n e g a t i v e p a t i e n t s , w h o w e r e a d m i t t e d to t h e h o s p i t a l w i t h a n i n f e c t i o n s u g g e s t i n g A ID S . I n a d d i t i o n , 13 H l V - s e r o n e g a t i v e h e a l t h c a r e w o r k e r s w e r e u s e d a s C o n t r o l s . A li t h e p a r t i c i p a n t s o f t h e s t u d y g a v e w r i t t e n c o n s e n t . T h e 1 9 8 8 r e v i s e d c r ite r ia f r o m C D C w e r e u s e d f o r c lin ic a i s t a g i n g o f t h e p a tie n ts '" . T h e s t u d y w a s c o n d u c t e d b e t w e e n M a r c h , 1 9 9 0 a n d J u n e ,1 9 9 3 .
P B M C p r e p a r a t i o n a n d v i r a l i s o l a t i o n p r o c e d u r e . D o n o r P B M C . T w e n t y m illilite r s o f h e p a r i n i z e d ( 2 0 U o f p r e s e r v a t i v e - f r e e h e p a r i n / m l ) b l o o d w e r e c o l l e c t e d f r o m h e a l t h y H IV s e r o n e g a t i v e v o l u n t e e r s a n d d i l u t e d in
s t e r i l e p h o s p h a t e b u f f e r e d s a l i n e ( 1 :1 ) .
P e r i p h e r a l b l o o d m o n o n u c l e a r c e lls (P B M C ) s e p a r a t e d b y F i c o l l - H y p a q u e g r a d i e n t c e n t r i f u g a t i o n w e r e s u s p e n d e d in s t e r i l e R P M I- 1 6 4 0 m e d i u m ( G IB C O L a b o r a t o r i e s , G r a n d I s l a n d , N e w Y o rk , N Y ), c o n t a i n i n g 15 % f e ta l c a l f s e r u m ( G I B C O ) , p e n i c i l l i n ( lO O p /m l) , s t r e p t o m y c i n ( l O u g / m l ) , a n d 2 m M L- g l u t a m i n e , a n d s t i m u l a t e d w i t h 4 p g / m l p h y t o h e m a g l u t i n i n (P H A , S ig m a C o ., St. L o u is ,
B r i t e s C, P e d r o s o C, S ilv a N , J o h n s o n J r W D , B a d a r ó R . T h e i n f l u e n c e o f C D 4 + T c e lls, H I V d i s e a s e s t a g e a n d z i d o v u d i n e i n H I V i s o l a t i o n i n B a h i a , B r a s il . R e v is ta d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 5 - 9 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .
Q u a l i t a t i v e a i i d Q u a n t i t a t i v e c u l t u r e s . F ifty q u a l i t a t i v e c u l t u r e s w e r e p e r f o r m e d in 2 8 H IV - 1 i n f e c t e d i n d i v i d u a i s , 5 b l o o d d o n o r s w i t h
i n d e t e r m i n a t e W B p a t t e r n s , t h r e e H IV -
s e r o n e g a t i v e p a t i e n t s , a c h i l d o f a H lV - in f e c te d m o th e r , a n d 13 s e r o n e g a t i v e C o n tro ls . P a t i e n t P B M C (2 0 x 1 0 ” c e lls ) w e r e c o - c u l t i v a t e d a c c o r d i n g t o s t a n d a r d p r o c e d u r e s d e s c r i h e d e l s e w h e r e 1". T h e c u l t u r e s u p e r n a t a n t s w e r e c o l l e c t e d a t 3 , 7 , 10, 14, 17, a n d 21 d a y s a n d s t o r e d a t -2 0 °C , f o r p 2 4 a n t i g e n a s s a y s .
T h i r t y - f i v e q u a n t i t a t i v e c u l t u r e s w e r e
p e r f o r m e d , a s p r e v i o u s l y d e s c r i h e d b y H o e t a l ', o n 3 0 H IV -1 s e r o p o s i t i v e i n d i v i d u a i s ( i n c l u d i n g 8 p a t i e n t s t e s t e d b y q u a l i t a t i v e m e t h o d s ) .
A s s a y s f o r H I V - 1 a n t i b o d i e s a n d p 2 4 a n t i g e n s . A n t i b o d i e s a g a i n s t H I V - 1 w e r e d e t e c t e d b y a n e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y (E IA ) a n d c o n f i r m e d b y W e s t e r n b l o t ( D u P o n t C o r p o r a t i o n , a n d B i o t e c h - D u p o n t , r e s p e c t i v e l y , W il l m i n g t o n , D E ,). T h e H IV -1 p 2 4 c o r e a n t i g e n w a s a s s a y e d in t h e s e r u m a n d in c u l t u r e s u p e r n a t a n t s b y a a n t i g e n c a p t u r e e n z y m e i m m u n o a s s a y ( A b b o t t L a b o r a t o r i e s , N o r t h C h ic a g o , IL ). A p o s i t i v e c u l t u r e w a s d e f i n e d a s e i t h e r a s i n g l e p 2 4 a n t i g e n c o n c e n t r a t i o n > l O O O p g / m l , 2 c o n s e c u t i v e s a m p l e s w i t h a p 2 4 a n t i g e n > 2 0 0 p g / m l , o r r e a c t i v e s a m p l e s ( a t l e a s t 2 tim e s a b o v e t h e c u t o f f v a l u e ) n e u t r a l i z e d b y a n ti- p 2 4 m o n o c l o n a l a n t i b o d y ( A b b o t t L a b o r a to r ie s ) .
C D 4 c e l l c o u n t s . C D 3 + , C D 4 + a n d C D 8 +
c e l l s w e r e c o u n t e d b y a s t a n d a r d i m m u n o f l u o r e s c e n t m e t h o d u s i n g m o u s e a n ti- h u m a n m o n o c l o n a l a n t i b o d i e s ( O r t h o m u n e O K T ^ , O K T x , a n d O K T g m o n o c l o n a l a n t i b o d i e s , O r t h o D i a g n o s t i c S y s te m s , R a rita n , N J). I n d i r e c t s t a i n i n g o f t h e l y m p h o c y t e s w i t h l a b e l e d m o n o c l o n a l a n t i b o d y w a s p e r f o r m e d u s i n g g o a t a n t i - m o u s e I g - F I T C . T h e l y m p h o c y t e s u b s e t s w e r e c o u n t e d u s i n g a e p i f l u o r e s c e n t m i c r o s c o p e ( M i c r o p h o t - F X A - N ik o n C o r p o r a t i o n , T o k y o , J a p a n ) .
S t a t i s t i c a l a n a l y s i s . D a ta w e r e e n t e r e d in t o
E P 1 IN F O v e r s i o n 5 .0 a n d a n a l y z e d b y F i s c h e r ’s E x a c t, S t u d e n f s t- te s t, o r K r u s k a ll W a llis te s t.
R ESU LTS
Q u a l i t a t i v e a n d Q u a n t i t a t i v e c u l t u r e s .
F o r t y - f i v e o f 5 0 ( 9 0 % ) H I V - 1 s e r o p o s i t i v e i n d i v i d u a i s h a d a t l e a s t o n e p o s i t i v e ( q u a l i t a t i v e o r q u a n t i t a t i v e ) c u l t u r e f o r H IV -1 . A li p a t i e n t s f r o m t h i s g r o u p h a d t h e u s u a l r is k
f a c t o r s a s s o c i a t e d w i t h A ID S , i n c l u d i n g
u n p r o t e c t e d s e x u a l a c tiv itie s w i t h h i g h r is k i n d i v i d u a i s a n d / o r i n t r a v e n o u s d r u g u s e . T h e p a t i e n t s c o n s i s t e d o f 3 2 m a l e h o m o / b i s e x u a l s , 10 i n t r a v e n o u s d r u g a b u s e r s (IV D A ) a n d 3 h e t e r o s e x u a l f e m a l e s w i t h H lV - p o s itiv e s e x u a l p a r t n e r s . C u ltu r e s w e r e n e g a t i v e f r o m fiv e b l o o d d o n o r s w i t h i n d e t e r m i n a t e W B p a t t e r n s , a c h i l d f r o m a n H lV - in f e c te d m o th e r , a n d f r o m t h e 3 s e r o n e g a t i v e p a t i e n t s . A ls o , a li 13 s e r o n e g a t i v e h e a l t h y C o n tro ls h a d n e g a t i v e H IV c u l t u r e s . S ix m o n t h s a f t e r t h e in itia l s t u d y r e p e a t e d H IV s e r o l o g y , i n t h e f iv e b l o o d d o n o r s w i t h i n d e t e r m i n a t e W B w a s n e g a t i v e f o r 3- T w o r e m a i n e d p r e s e n t i n g a n i n d e t e r m i n a t e W B p a t t e r n f o r 18 m o n t h s o f f o llo w - u p .
T a b le 1 c o m p a r e s t h e r e c o v e r y o f H IV b y q u a l i t a t i v e a n d q u a n t i t a t i v e c u l t u r e m e t h o d s . T h e r e w a s n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n c u l t u r e s f r o m t h e s a m e i n d i v i d u a l u s i n g t h e q u a l i t a t i v e v e r s u s t h e q u a n t i t a t i v e m e t h o d . T h e o v e r a l l r a t e o f p o s i t i v e H IV c u l t u r e s f o r t h e q u a l i t a t i v e a n d q u a n t i t a t i v e m e t h o d s w a s 8 1 %
a n d 8 9 % , r e s p e c t i v e l y , e x c l u d i n g t h e 3
s e r o n e g a t i v e A ID S p a t i e n t s a n d t h e i n d i v i d u a i s w i t h i n d e t e r m i n a t e W B .
C o r r e l a t i o n o f C D 4 + T - c e l l a n d c l i n i c a i s t a g e w i t h a p o s i t i v e H I V - 1 c u l t u r e . H i g h e r r a t e
o f v ir a l c u l t u r e p o s i t i v i t y w a s a s s o c i a t e d w i t h a d v a n c e d H IV d i s e a s e . T h e r a t e o f v ir a l i s o l a t i o n w a s 6 0 % ( 1 2 / 2 0 ) f o r c la s s 1I/IV A p a t i e n t s , in c o n t r a s t t o 9 6 % ( 4 4 / 4 6 ) f o r A ID S
IV -C p a t i e n t s . T h e m e a n C D 4 + T c e ll c o u n t
T a b l e l - R a t e s o f p o s i t i v i t y o f q u a l i t a t i v e a n d q u a n t i t a t i v e c u l t u r e s f o r H I V - 1 .
P a t i e n t s C a t e g o r y Q u a l i t a t i v e Q u a n t i t a t i v e T o t a l
n % n % n %
C D C C l a s s IV -C A ID S 2 0 / 2 2 91 2 4 / 2 4 1 00 4 4 / 4 6 96*
C D C C l a s s I I-IV A 5 / 9 5 5 7 /1 1 64 1 2 /2 0 60*
H IV -1 S e r o n e g a t i v e 0 / 3 - 0 - 0
-I n d i v i d u a i s w i t h
B rite s C, P e d r o s o C, S ilv a N , J o h n s o n J r W D , B a d a r ó R . T h e i n f l u e n c e o f C D 4 + T ce lls, H I V d i s e a s e s t a g e a n d z i d o v u d i n e i n H I V is o l a tio n i n B a h i a , B r a s il . R e v is ta d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 5 - 9 , j a n - fe v , 1 9 9 6 .
w a s 311 ± 3 1 6 f o r i n d i v i d u a i s w i t h p o s i t i v e c u ltu re s , a n d 8 7 2 + 6 7 0 c e l l s / p l f o r t h o s e w i t h n e g a tiv e re s u lts ( p = 0 .0 3 , K r u s k a ll-W a llis te s t) . W h e n t h e r e s u lts w e r e a n a l y z e d b y s tr a tif y in g
C D 4 + T -c e lls c o u n t s o f > 5 0 0 , 2 0 0 - 5 0 0 a n d <
2 0 0 p e r p l, a s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e w a s o b s e r v e d b e t w e e n c u l t u r e s f r o m p a t i e n t s w i t h
C D 4 + T -c e ll c o u n t l e v e is > 5 0 0 c e l l s / p l a n d
th o s e w ith < 5 0 0 c e l l / p l ( T a b le 2).
T a b le 2 - P o s i t i v i t y o f H I V - 1 c u l t u r e s a n d C D 4 + c e l l c o u n t s . C D 4 + c e l l c o u n t / m m 3 C u l t u r e s ; T o t a l
n %
> 5 0 0 9 / 1 4 6 5
2 0 0 - 5 0 0 1 2 /1 5 8 0
< 2 00 2 5 / 2 5 100
T o ta l 4 6 /5 4 8 5
T h e r e w a s a l s o a s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e in c u l t u r e s p o s i t i v i t y f o r
P
a t ie n t s w i t h C D 4 + c e ll c o u n t s a b o v e a n d b e l o v v 5 0 0 / vü ( p = '0 . 0 2 i s h e r e x a c t te s t) .T h e c o r r e la tio n o f t h e ti t e r o f in f e c t i o u s H IV -1 /1 06 P B M C , a n d l e v e is o f C D 4 + c e lls in th e p a tie n ts w ith p o s itiv e c u l t u r e s is p r e s e n t e d in th e T a b le 3- P r e v i o u s u s e o f Z i d o v u d i n e d id n o t a p p e a r to a l t e r a b ility t o i s o l a t e H IV f r o m p a tie n ts ’ P B M C ). T h e r a t e o f p o s it i v i t y w a s sim ila r fo r p a tie n ts u s i n g A Z T ( 3 1 / 3 4 ) a n d , f o r in d iv id u a is w h o d i d n o t u s e t h a t d r u g ( 7 / 2 5 ) , re g a rd le s s th e ty p e o f c u l t u r e ( p = 0 .1 7 , F i s c h e r e x a c t test).
V iral lo a d a ls o c o r r e l a t e d w i t h t h e le v e i o f
C D 4 + T -c e ll c o u n ts . I n d i v i d u a i s w i t h C D 4 + c o u n ts > 50 0 c e l l s / p l h a d 12 ± 21 T C ID w h i l e
t h o s e w i t h C D 4 + c o u n t s < 5 0 0 c e l l s / p l h a d a 3 5 - f o ld h i g h e r v ir a l b u r d e n , 4 4 6 ± 1 4 0 6 T C ID . It is o f n o t e t h a t 2 m i l l i o n P B M C p e r c u l t u r e w e r e s u f f i c i e n t t o d e t e c t H IV b y c u l t u r e in 5 7 % o f i n d i v i d u a i s w i t h C D 4 + > 5 0 0 / p l ( T a b l e 4 ).
A s s a y s f o r p 2 4 A g d e t e c t i o n w e r e
p e r f o r m e d in s e r u m s a m p l e s o f 35 i n d i v i d u a i s (3 2 s e r o p o s i t i v e a n d 3 s e r o n e g a t i v e f o r H IV 1 i n f e c t i o n ) . A m o n g t h e s e r o p o s i t i v e in d iv id u a is , 21 (6 6 % ) h a d d e t e c t a b l e l e v e i s o f p 2 4 a n t i g e n in t h e i r s e r a . T h e 3 s e r o n e g a t i v e p a t i e n t s t e s t e d h a d a n e g a t i v e p 2 4 a n t i g e n t e s t . T h e r a t e o f c u l t u r e p o s i t i v i t y w a s s im ila r f o r p a t i e n t s w i t h d e t e c t a b l e a n t i g e n e m i a (8 2 % ) o r n o t (7 5 % ). T h e f r e q u e n c y o f p 2 4 a n t i g e n e m i a w a s a lm o s t t w o t i m e s h i g h e r a m o n g t h e A ID S c l a s s IV -C p a t i e n t s (8 4 % ) w h e n c o m p a r e d w i t h t h e c la s s II/IV -A g r o u p ( o n l y 4 8 % h a d d e t e c t a b l e l e v e is o f p 2 4 a n t i g e n , p = 0 .0 0 9 , Y a te s c o r r e c t e d ) .
D IS C U S S IO N
I n t h e e v a l u a t i o n o f q u a l i t a t i v e a n d q u a n t i t a t i v e c u l t u r e m e t h o d s , a n o v e r a l l H IV p o s i t i v i t y r a t e o f 8 5 % w a s d e t e c t e d in H IV -
s e r o p o s i t i v e i n d i v i d u a i s , w i t h a
60
% c u l t u r ep o s i t i v i t y in le s s ill H lV - in f e c te d i n d iv id u a is ( a s y m p t o m a t i c c la s s I I /I I I t o IV -A ). W e w e r e a b l e t o d e t e c t t h e v ir u s in 9 6 % o f A ID S p a t i e n t s
w i t h s t a g e d i s e a s e c l a s s IV -C . T h i s is
c o m p a r a b l e to w h a t h a s b e e n r e p o r t e d in t h e lite r a tu r e . Q u a n t i t a t i v e o r q u a l i t a t i v e m e t h o d s w a s n o t s ig n if ic a n tly d i f f e r e n t in t h e i r a b ility to d e t e c t H IV -1 in c u l t u r e .
T a b l e 3 - T i t e r s o f i n f e c t i o u s H I V - 7 i n 3 5 c u l t u r e s o f P B M C . m e a n o f C D 4 + T - C e l l s a n d u s e o f z i d o v u d i n e t h e r a p y
T C ID /1 0 ÓP B M C N u m b e r o f c u l t u r e s % M e a n o f C D 4 + c e l l s U s e o f z i d o v u d i n e
0 4 11 9 0 7 ± 5 4 2 0
0 .5 14 4 0 2 2 2 ± 2 1 8 7
5 7 20 3 1 4 ± 3 4 0 1
50 5 14 3 9 0 ± 2 7 5 1
5 00 3 9 1 9 0 ± 13 4 0
5 0 0 0 2 6 3 1 0 ± 1 10 1
5 0 0 0 0 0 -
-T o ta l 3 5 100 10
T h e m e a n o f T C I D f o r i n d i v i d u a i s w i t h C D 4 + T - c e l l s a b o v c h a d a m e a n o f 4 4 6 ± 1 3 7 9 T C ID .
• 5 0 0 / p l w a s 12 ± 21 w h i l e t h o s e p a t i e n t s w i t h C D 4 + T - c e ll c o u n t s b e l o w 5 0 0 / p l
T a b l e 4 * C u l t u r e i s o l a t i o n o f H I V s t r a t i f i e d b y C D 4 + T - c e l l c o u n t s .
D i l u t i o n s o f p a t i e n r P B M C
C D 4 T -c e lls p e r p l 2 x 1 0 h 2 x K P 2 x 1 0 4 2 x l O - 2 x lí) 2
n % n % n % n % n %
50 4 / 7 5 7 1 /7 2 9 2 / 7 17 0 / 7 0 0 / 7 0
2 00 -5 0 0 1 1 /1 2 9 2 8 / 1 2 6 7 3 / 1 2 25 3 / 1 2 25 1 /1 2 8
200 1 3 /1 3 1 0 0 5 / 1 3 3 8 2 / 1 3 15 0 / 1 3 0 1 /1 3 8
B r ite s C, P e d r o s o C] S ilv a N , J o h n s o n J r W D , B a d a r ó R . T h e i n f l u e n c e o f C D 4 + T c e lls, H I V d i s e a s e s t a g e a n z i d o v u d i n e i n H I V is o l a t i o n i n B a h i a , B r a s il . R e v is ta d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 :5 -: j a n - f e v . 1 9 9 6 .
P a t i e n t s w i t h C D 4 + T -c e ll c o u n t s < 5 0 0 /)il a r e m o r e lik e ly t h a n t h o s e w i t h > 5 0 0 /1 t o h a v e a p o s i t i v e v ir a l c u l t u r e . I n d i v i d u a i s w i t h a n e g a t i v e H IV c u l t u r e h a d a m e a n C D 4 + T - c e ll c o u n t t h a t w a s t h r e e t i m e s h i g h e r t h a n t h a t o f p a t i e n t s w i t h p o s i t i v e H IV c u l t u r e . O u r r e s u lts w e r e s i m i l a r to t h o s e r e p o r t e d b y S p ir a a n d
B u r k e J T h e le v e i o f C D 4 + T - c e lls in a b ility to
c u l t u r e H IV f r o m p a t i e n t P B M C p r o b a b l y r e f le c ts t h e h i g h e r v ira l b u r d e n in p a t i e n t s w i t h m o r e a d v a n c e d H IV d i s e a s e . T h ís is s u g g e s t e d b y o u r d a t a a n d b y o t h e r s 2 9 ” . T h u s , t h e s e n s itiv ity f o r d e t e c t i n g H IV b y c u l t u r e f o r p a t i e n t s w i t h le s s a d v a n c e d H IV i n f e c t i o n a n d A ID S is 6 0 % a n d 9 6 % , r e s p e c tiv e ly . V iral c u l t u r e s w e r e n e g a t i v e f o r H lV - s e r o n e g a tiv e i n d i v i d u a i s , a n d in fiv e l o w r is k b l o o d d o n o r s w i t h a n i n d e t e r m i n a t e W B . A c c o r d i n g to o t h e r s t u d i e s ” 1 t h is w o u l d s u g g e s t t h a t t h e y w e r e n o t in f e c t e d . T h e la c k o f f a ls e p o s i t i v e s f r o m c u l t u r e s o b t a i n e d f r o m t h e s e H lV - s e r o n e g a tiv e o r i n d e t e r m i n a n t W B i n d i v i d u a i s i n d i c a t e s th a t t h e s p e c i f i c i t y o f c u l t u r e m e t h o d s is 100 % .
I n o u r e x p e r i e n c e t h e p o s it i v i t y o f c u l t u r e s w a s n o t a f f e c t e d b y z i d o v u d i n e u s e , a s p r e v i o u s l y o b s e r v e d 3. A m o n g t h e p a t i e n t s
u s i n g z i d o v u d i n e a n d h a v i n g p o s i t i v e
q u a n t i t a t i v e c u l t u r e , 8 h a d a T C ID o f < 5, w h i l e o n l y 2 h a d a h i g h e r le v e i o f i n f e c t i o n .
I n c o n c l u s i o n , t h e v ir a l i s o l a t i o n f r o m H IV - 1 i n f e c t e d p a t i e n t s in o u r s t u d y s h o w e d a s e n s itiv ity s i m i l a r t o t h o s e r e p o r t e d in t h e l ite r a tu r e . H o w e v e r , t h e h i g h e r C D 4 + T -c e ll c o u n t s in t h e i n d i v i d u a i s w i t h n e g a t i v e c u l t u r e s e x p l a i n t h e l o w e r r a t e o f v ir a l i s o l a t i o n in t h e le s s ill H IV i n f e c t e d i n d i v i d u a i s c o m p a r e d to t h e h i g h e r r a t e in A ID S c la s s IV -C p a t i e n t s .
R E S U M O
T e n t a t i v a d e i s o l a m e n t o d o v í r u s ti p o 1 d a i m u n o d e f i c i ê n c i a a d q u i r i d a ( V 1 H - 1 ) f o i r e a l i z a d a e m 7 2 i n d i v í d u o s s e n d o 5 1 p a c i e n t e s c o m s o r o l o g i a p o s i t i v a p a r a o V IH -1 , c o n f i r m a d a p o r
W e s te r n b lo t; 5 d o a d o r e s d e s a n g u e c o m p a d r ã o i n d e t e r m i n a d o a o W e s te r n b lo t; 3 i n d i v í d u o s c o m d i a g n ó s t i c o c l í n i c o d e A ID S , p o r é m c o m s o r o l o g ia n e g a t i v a , e 1 3 p r o f i s s i o n a i s d e s a ú d e s o r o n e g a tiv o s . O s p a c i e n t e s f o r a m e s t r a t i f i c a d o s d e a c o r d o c o m a c o n t a g e m d e c é l u l a s C D 4 + , e s t á g i o c l í n i c o , a n t i g e n e m i a (p 2 4 ) e u s o d e z i d o v u d i n e . A s c u l t u r a s p a r a o V IH -1 f o r a m p o s i t i v a s e m 4 5 / 5 0 ( 9 0 % ) t e n t a t i v a s . H o u v e u m a c o r r e l a ç ã o i n v e r s a e n t r e o n ú m e r o d e c é lu la s C D 4 + e a f r e q ü ê n c i a d e i s o l a m e n t o d o V IH -1 . /I s c u l t u r a s f o r a m p o s i t i v a s e m 8 4 % d o s
i n d i v í d u o s c o m C D 4 + < 2 0 0 , c o n t r a 4 8 % d p o s i t i v i d a d e n a q u e l e s c o m c o n t a g e m d e c é l u l a C D 4 + a c i m a d e s t e v a l o r . O u s o d e z i d o v u d i n e n ã i i n t e r f e r i u n a p o s i t i v i d a d e d a s c u l t u r a s . C o n c l u í m o . q u e a s e n s i b i l i d a d e d o s m é t o d o s d e c u l t u r c q u a l i t a t i v o e q u a n t i t a t i v o é s i m i l a r p a r a a d e t e c ç â c d o V IH -1 . A t a x a d e p o s i t i v i d a d e d a s c u l t u r a s n ã t f o i a f e t a d a p e l o u s o p r é v i o d e z i d o v u d i n e , m a s f o i d i r e t a m e n t e p r o p o r c i o n a l a o g r a u d e i m u n o d e f i c i ê n c i a d o s p a c i e n t e s .
P a l a v r a s - c h a v e s : V IH . p 2 4 . I s o l a m e n t o v i r a l. B r a s il . C D 4 + l i n f ó c i t o s T.
A C K N O W L E D G M E N T
W e t h a n k D r. R o b e r t A k r i d g e f o r h i s c r i t i c a i r e v i e w o f t h e p a p e r , a n d Z a c a r i a s A . S a n t a n a Jr. f o r t h e C o m p u t e r a n d e d i t o r i a l a s s i s t e n c e o f t h i s m a n u s c r i p t .
R E F E R E N C E S
1. B a r r é -S in o u s s i F, C h e r m a n n JC , R e y F, N u g e y r e MT, C h a m a r e t S, G u r e s t J, D a n g u e t C , A x le r -B lin C, B r u n - V é z in e t F, R o z e m b a u m W, M o n t a g n ie r L.
I s o l a t i o n o f a T - ly m p h o t r o p ic R e t r o v ir u s f r o m a P a t ie n t a t R isk f o r A c q u ir e d I m m u n e D e f i c i e n c y S y n d r o m e (A I D S ). S c i e n c e 2 2 0 : 8 6 8 - 7 1 , 1 9 8 3
2 . G a llo R C , S a rin PS, G e lm a n n EP R o b e r t - G u r o f f M, R ic h a r d s õ n E, K a ly a n a r a m a n V S, M a n n D , S id h u G D , S ta h l RE, Z o lla -P a z n e s S, L e ib o w i t c h J, P o p o v i c M . I s o l a t io n o f H u m a n T -C ell L e u k e m ia V ir u s in A c q u i r e d I m m u n e D e f i c i e n c y S y n d r o m e (A I D S ). S c ie n c e , 2 2 0 : 8 6 5 - 8 1 9 8 3 .
3 . G a llo R C , S a la h u d d in SZ, P o p o v i c M , S h e a r e r G M , K a p la n M , H a y n e s BF, P a lk e r t J, R e d f i e l d R, O le s k e J, S a fa i B ,W h i t e G, F o s t e r P M a r k h a m P D . F r e q u e n t D e t e c t i o n a n d I s o l a t i o n o f C y t o p a t h i c R e t r o v ir u s e s (H TL V -III) f r o m P a t i e n t s w i t h A ID S a n d a t R isk o f A ID S . S c i e n c e 2 2 4 : 5 0 0 - 3 , 1 9 8 4 .
4 . L e v y JA, H o f f m a n A D , K r a m e r SiM, L a n d is JA, S c h im a b u k u r o J M , O s h i r o LS. I s o l a t i o n o f L y m p h o c y t o p a t h i c R e t r o v i r u s e s f r o m S a n F r a n c i s c o P a t ie n t s w i t h A ID S . S c i e n c e 2 2 5 : 8 4 0 - 2 ,
1 9 8 4 ,
5. J a c k s o n JB , C o o m b s RW, S a n n e r u d K , R h a m e FS, B a lf o u r H H Jr. R a p id a n d S e n s i t iv e V ir a l C u lt u r e M e t h o d f o r F lu m a n I m m u n o d e f l c i e n c y V ir u s T y p e 1. J o u r n a l o f C lin ic a i M i c r o b io l o g y 2 6 : 1 4 1 6 - 8 , 1 9 8 8 .
B r ite s C, P e d r o s o C, S ilv a N , J o h n s o n J r W D , B a d a r õ R . T h e i n f l u e n c e o f C D 4 + T c e lls, H I V d i s e a s e s t a g e a n d z i d o v u d i n e in H I V is o l a tio n i n B a h i a , B r a s il . R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 5 - 9 , ja n - f e v , 1 9 9 6 .
7. C o o m b s RW; C o llie r AC; A lla in JP; N ik o r a B; L e u t h e r M; G j e r s e t GF; C o r e y L. P la s m a v ir e m ia in H u m a n I m m u n o d e f lc ie n c y V ir u s I n f e c t io n . N e w E n g la n d J o u r n a l o f M e d i c i n e 3 2 1 : 1 6 2 6 - 3 1 , 1 9 8 9 .
8 . H o D D , M o u d g il T, A la m M . Q u a n t i t a t i o n o f H u m a n I m m u n o d e f lc ie n c y V ir u s T y p e 1 in t h e B lo o d o f I n f e c t e d P e r s o n s . N e w E n g la n d J o u r n a l o f M e d ic in e 3 2 1 : 1 6 2 1 - 1 6 2 5 , 1 9 8 9 .
9 . M i n i s t é r i o d e S a ú d e . A I D S - B o l e t i m E p id e m io l ó g ic o , a n o V I, n ° 0 8 , 1 9 9 3
-1 0 . R e v is io n o f t h e C D C S u r v e il la n c e C a se D e f in it i o n f o r A c q u ir e d I m m u n o d e f l c i e n c y S y n d r o m e . M o r ta lity a n d M o r b id it y W e e k ly R e p o r t 3 6 ( s u p p l 1 ):3 S -1 5 S , 1 9 8 7 .
l l . S p i r a TJ, K a p la n JE, F e o r in o P M , W a r f ie ld DT, F i s h b e i n D B , B o z e m a n L H . H u m a n I m m u n o d e f lc ie n c y V ir u s V ir e m ia a s a P r o g n o s t ic I n d i c a t o r i n H o m o s e x u a l M e n w i t h L y m p h a d e n o p a t h y S y n d r o m e . N e w E n g la n d J o u rn a l o f M e d i c in e 3 1 7 : 1 0 9 3 - 4 , 1 9 8 7 .
12. B u rk e D S, F o w le r A K , R e d f le ld RR, D il w o r t h S, O st er C N . I s o la t io n o f H IV-1 f r o m t h e B lo o d o f
S e r o p o s it iv e A d u lt s : P a t i e n t s S ta g e o f I l ln e s s a n d S a m p le I n o c u lu m S iz e a r e M a j o r D e t e r m i n a n t s o f a P o s i t iv e C u lt u r e . J o u r n a l o f A c q u i r e d I m m u n e D e f i c i e n c y S y n d r o m e 3 : 1 1 5 9 - 1 1 6 7 , 1 9 9 0 .
13- J a c k s o n JB , M a c D o n a ld KL, C a d w e ll J, S u lliv a n C, K lin e W E , H a n s o n M , S a n n e r u d KJ, S tr a m e r SL, F ild e s NJ, K w o k SY. A b s e n c e o f H IV I n f e c t i o n in B lo o d D o n o r s w i t h I n d e t e r m in a t e W e s t e r n b lo t T e s t f o r A n t ib o d y t o H I V 1 . N e w E n g la n d J o u r n a l o f M e d i c in e 3 3 2 : 2 1 7 - 2 2 2 , 1 9 9 0 .
1 4 . C e l u m CL, C o o m b s RW, L a f fe r ty W ., I n u i T S , L o u ie P H , G a t e s C A , M c C r e e d y BJ, E g a n R, G r o v e T, A l e x a n d e r S . I n d e t e r m i n a t e H u m a n I m m u n o d e f l c i e n c y V ir u s T y p e 1 W e s t e r n B lo ts: S e r o c o n v e r s i o n R is k , S p e c if ic it y o f S u p p le m e n t a l T e st , a n d a n A lg o r i t h m f o r E v a lu a t io n . J o u r n a l o f I n f e c t io u s D i s e a s e s 1 6 4 : 6 5 6 - 6 4 , 1 9 9 1 .
