R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 ( 1 ) : 5 3 - 5 4 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .
TRIATOMINE’S EMBRYO EXTRACTS PROMOTE GROWTH
OF CULTURE FORMS OF
TRYPANOSOMA CRUZI
Nelson J. Alvarenga, Maria José F. Morato, Lilian M.G.
Bahia-Oliveira, Juliana A.S. Gomes, Alessandra LA. Botelho,
Rodrigo Correa-Oliveira and Elisabeth Bronfen
A m o n g 5 9 s t u d i e d c h r o n i c c h a g a s i c p a t i e n t s , i n f o u r o f t h e m it w a s o n l y p o s s i b l e t o i s o l a t e T r y p a n o s o m a c r u z i u s i n g h a e m o c u l t u r e , b u t n o t x e n o d i a g n o s i s 1. T h i s f a i l u r e i n i s o l a t i n g T . c r u z i u s i n g x e n o d i a g n o s i s p e r f o r m e d w i t h t h r e e d i f f e r e n t t r i a t o m i n e s p e c i e s , r e p r e s e n t s a n o p p o r t u n i t y t o e v a l u a t e t h e i n t e r a c t i o n b e t w e e n T . c r u z i a n d i t s i n f e c t i o n w i t h i n t h e t r i a t o m i n e v e c t o r . B a s e d o n o b s e r v a t i o n t h a t a t r i a t o m i n e e m b r y o - c e l l - l i n e a l l o w s t h e d i f f e r e n t i a t i o n o f t h e p a r a s i t e t o m e t a c i c l i c f o r m s 5 a n d t h e i n d u c t i o n o f p a r a s i t e g r o w t h a n d d i f f e r e n t i a t i o n i n c u l t u r e s , w h e n s u p p l e m e n t e d w i t h t r i a t o m i n e s ’ i n t e s t i n a l e x t r a c t s 2 w e a r g u e t h a t s o m e o f t h e q u e s t i o n s r e l a t e d t o t r i a t o m i n e ’s s u s c e p t i b i l i t y a n d i n f e c t i o n c o u l d b e a n s w e r e d b y s t u d d i n g t h e i n f l u e n c e o f t h e v e c t o r ’s o r g a n e x t r a c t s o n p a r a s i t e g r o w t h i n c u l t u r e m e d i a .
T h e p r e s e n t s t u d y i s b e i n g c o n d u c t e d t o a n a l y z e t h e r o l e o f d i f f e r e n t o r g a n h o m o g e n a t e s , f r o m e m b r y o s t o a d u l t s t a g e s o f t r i a t o m i n e s , o n t h e g r o w t h a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f t w o T . c r u z i s t r a i n s ( H e r m a n d F r a n ) i s o l a t e d o n l y b y h e m o c u l t u r e f r o m t w o c h a g a s i c p a t i e n t s a n d f r o z e n i m m e d i a t e l y a f t e r i s o l a t i o n . T h e i s o l a t e s w e r e u s e d a f t e r f i v e p a s s a g e s i n L I T m e d i a .
S u s p e n s i o n s o f f o u r a n d t h r e e d a y s o l d e m b r y o s , o f D i p e t a l o g a s t e r m a x i m u s a n d R h o d n i u s p r o l i x u s r e s p e c t i v e l y , w e r e o b t a i n e d f r o m g r o u n d e g g s i n P B S ( p H 7 . 2 ) . T h e e x t r a c t s w e r e f i l t e r e d e i t h e r w i t h 0 . 2 2 o r 0 . 4 5 p m M i l l i p o r e f i l t e r s , i n o r d e r t o o b s e r v e p o s s i b l e d i f f e r e n c e s i n t h e f l a g e l l a t e s g r o w rt h d u e t o t h e
L a b o r a t ó r i o d e B i o l o g i a d e T r i a t o m í n e o s e L a b o r a t ó r i o d e
I m u n o l o g i a , C e n t r o d e P e s q u i s a s R e n é R a c h o u / F I O C R U Z ,
B e lo H o r i z o n t e , M . G . 3 0 1 9 0 - 0 0 2 , B r a z i l
S u p p o r t e d b y P A P E S / F I O C R U Z ( 0 3 8 )
A d d r e s s t o : D r . N e l s o n J . A l v a r e n g a - C e n t r o d e P e s q u i s a s
R e n é R a c h o u , F I O C R U Z - C a i x a P o s t a l 1 7 4 3 , 3 0 1 6 1 - 9 7 0 ,
B e l o H o r i z o n t e , M G , B r a z i l . F a x : 0 3 1 2 9 5 3 1 1 5
R e c e b i d o p a r a p u b l i c a ç ã o e m 0 5 / 0 4 / 9 5 .
p r e s e n c e o f p r o t e i n m o l e c u l e s o f d i f f e r e n t s i z e , a n d s t o r e d i n - 2 0 ° C b e f o r e b e i n g a d d e d t o L I T c u l t u r e m e d i u m . T h e p r o t e i n c o n c e n t r a t i o n o f t h e e x t r a c t s w a s m e a s u r e d a f t e r L o w r y e t a l 4 a n d a d j u s t e d t o l 6 0 p g / m l i n t h e c u l t u r e ( f i n a l c o n c e n t r a t i o n ) . T h e i n t i a l i n o c u l u m w a s o f 3 x 1 0 6 f l a g e l l a t e s i n t h e l o g a r i t h i m i c g r o w t h f o r t h e v a r i o u s s a m p l e s . T h e c u l t u r e s w e r e m a i n t a i n e d a t 2 7 ° C . E l e v e n d a y s a f t e r a d d i t i o n o f t h e e x t r a c t s t o t h e c u l t u r e s , t h e n u m b e r o f f l a g e l l a t e s w a s d e t e r m i n e d u s i n g a b l o o d c e l l c o u n t e r f r o m t r i p l i c a t e c u l t u r e s .
T h e r e s u l t s h a v e s h o w n t h a t b o t h e m b r y o e x t r a c t p r e p a r a t i o n s ( R . p r o l i x u s a n d D . m a x i m u s) w e r e a b l e t o p r o m o t e a n e x a c e r b a t i o n o n t h e g r o w t h o f t h e t w o T . c r u z i s t r a i n s a c h i e v i n g n u m b e r s o f f l a g e l l a t e s e i g h t t i m e s h i g h e r t h a n t h e o n e o b s e r v e d i n t h e c o n t r o l c u l t u r e s o f t h e p a r a s i t e ( T a b l e 1 ) .
T a b i e 1 - N u m b e r o f f l a g e ü c i t e s / m l C x l ( f i ) o f t w o T . c r u z i s t m n i s ( H e r m a t i d F r a n ) a f t e r 1 1 d a y s i n 1 1 1 ' c u l t u r e m e d i u m w i t h R. p r o l i x u s ( R h ) o r D . m a x i m u s ( I h n ) e m b r y o e x t r a c t s f i l t e r e d t h r o u g h t w o d i f f e r e n t m e m b r a n e p o r e s ( 0 . 2 2 a n d 0 . 4 5 \ i m ) .
S t r a i n s C o n t r o l R h ( 0 . 2 2 ) R h ( 0 . 4 5 ) D m ( 0 . 2 2 ) D m ( 0 . 4 5 ) H e r m 4 . 7 2 0 . 1 1 5 . 7 1 7 . 6 2 4 . 3 F r a n 2 . 5 1 5 - 3 1 3 . 4 1 8 . 8 2 0 . 2
N o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s w e r e o b s e r v e d i n t h e p e r c e n t o f m e t a c y c l i c t r y p o m a s t i g o t e s i n t h e c u l t u r e s .
REFERENCES
1. Bronfen E, Rocha FSA, iMachado GBN, Perillo MiM,
Romanha AJ, Chiari E. Isolam ento de amostras do
T r y p a n o s o m a c r u z i
por x e n o d ia g n ó stic o e
hemocultura em pacientes na fase crônica da
D oen ça d e Chagas. M emórias d o Instituto
Oswaldo Cruz 84:237-240, 1989.
2. Isola ELD, Lammel ZM, Katzin VJ, Gonzalez Cappa
SM. Influence o f organ extracts o f
T n a t o m ai n f e s t a n s
on differentiation o f
T r y p a n o s o m a c r u z i .Journal o f Parasitology 67 :53-58,1981.
3. Lanar DC. G ro w th and d iffe r e n tia tio n o f
T r y p a n o s o m a c r u z i
cultivated w ith a
T r i a t o m aC o m u n i c a ç ã o . A l v a r e n g a N J , M o r a t o M J F , B a h i a - O l i v e i r a L M G , G o m e s J A S , B o t e l h o A L A , C o r r e a - O l i v e i r a , B r o n f e n E . T r i a t o m i n e ’s e x t r a c t s p r o m o t e g r o w t h o f c u l t u r e f o r m s
o/T rypanosom a caizi.
R e v i s t a d a S o c i e d a d e B r a s i l e i r a d e M e d i c i n a T r o p i c a l 2 9 : 5 3 - 5 4 , j a n - f e v , 1 9 9 6 .i n f e s t a n s - e m b r o y - c e l l - l i n e .
