Enzimas hepáticas
Os testes da função hepática incluem a determinação de substâncias que são libertadas como resultado da ocorrência de dano tecidular, como as enzimas cujas determinações são comumente utilizadas no diagnóstico de doença hepática que incluem a aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (ALP) e γ-glutamil transferase (GGT). A determinação das enzimas hepáticas é muito útil na deteção de lesões hepatocelulares que causam necrose celular, e na diferenciação de patologias de origem funcional de patologias de origem obstrutiva. (9)
ALT e GGT estão presentes em vários tecidos, mas a sua concentração plasmática reflete primariamente um fígado danificado. AST é encontrada no fígado, músculo e eritrócitos. Por sua vez, a ALP existe em variados tecidos, mas normalmente reflete
35 problemas no fígado e nos ossos. ALP e GGT são úteis como marcadores de lesão obstrutiva. Além disso, a interpretação das duas em conjunto é útil na distinção entre doenças do esqueleto ou hepatobiliares. (9) As determinações de fosfatase alcalina são úteis no diagnóstico de patologias ósseas, hepáticas, da paratiróide e intestinais. (33) A GGT é uma enzima não específica da doença hepática, com aumento induzido por medicamentos. Em pacientes com hábitos de alcoolismo, foram relatados níveis elevados de γ-glutamil transferase. (34) Por outro lado, AST e ALT apresentam duas isoenzimas – citosol e mitocondrial. Em dano celular moderado é a citosólica a mais elevada. Em dano celular elevado, apresentam-se as duas aumentadas no plasma. No caso da ALT, a mitocondrial é uma fração mínima, pelo que apenas a citosólica aparece no soro. Estas enzimas são libertadas pelo tecido hepático danificado e a sua atividade aumenta no plasma rapidamente. A razão entre as duas (AST/ALT) é usada para avaliar a extensão das lesões. (9) Os níveis de AST podem apresentar-se elevados mesmo antes do aparecimento clínico da icterícia, em doenças hepáticas, nomeadamente hepatites, necrose, cirrose. (9,35) As determinações de ALT são utilizadas no diagnóstico e tratamento de hepáticas e cardíacas. (36)
Aspartato aminotransferase
Equipamento: Dimension® Integrated Chemistry System Amostra: soro e plasma
Interferentes: a hemólise eleva falsamente os resultados de AST. A lipémia também poderá interferir. (35)
Método: ensaio enzimático
A conversão de NADH em nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) origina uma alteração da absorvância que é diretamente proporcional à atividade da AST e é medida utilizando uma técnica cinética bicromática (340, 700 nm). (35)
AST, pH 7.8
L-aspartato + ɑ-cetoglutarato → L-glutamato + oxaloacetato
MDH
36
Legenda: aspartato aminotransferase (AST); malato desidrogenase (MDH); nicotinamida adenina dinucleótido reduzido (NADH); nicotinamida adenina dinucleótido (NAD)
Valores de referência: 15 – 37 U/L
Alanina aminotransferase
Equipamento: Dimension® Integrated Chemistry System Amostra: soro e plasma (heparina de lítio)
Interferentes: a bilirrubina não conjugada e conjugada reduz os resultados. Os triglicéridos e a lipémia também podem interferir. (36)
Método: ensaio enzimático
A conversão de NADH em NAD origina uma alteração da absorvância que é diretamente proporcional à atividade da ALT e é medida utilizando uma técnica cinética bicromática (340, 700 nm). (36)
ALT, pH 7.4, tampão
L-alanina + ɑ-KG → L-glutamato + piruvato
LDH
Piruvato + NADH (H+) → Lactato + NAD+
Legenda: alanina aminotransferase (ALT); α-cetoglutarato (ɑ-KG); lactato desidrogenase (LDH); nicotinamida adenina dinucleótido reduzido (NADH); nicotinamida adenina dinucleótido (NAD)
Valores de referência: Mulheres: 14 – 59 U/L Homens: 16 – 63 U/L
Fosfatase alcalina
Equipamento: Dimension® Integrated Chemistry System Amostra: soro e plasma (heparina de lítio)
37 Interferentes: triglicéridos e lipémia poderão interferir no resultado. (33)
Método: ensaio enzimático
Este método responde a todas as isoenzimas de ALP. A variação da absorvância a 405nm originada pela reação e medida com uma técnica de cinética bicromática (405, 510nm), é proporcional à atividade da enzima. (33)
ALP, pH 10.25, Mg/Zn
p-NPP + AMP → p-NP + AMP+ PO4
Legenda: fosfatase alcalina (ALP); magnésio (Mg); zinco (Zn); p-nitrofenilfosfato (p- NPP); 2-amino-2-metil-1-propanol (AMP); p-nitrofenol (p-NP); fosfato (PO4)
Valores de referência: 46 – 116 U/L
γ-glutamil transferase
Equipamento: Dimension® Integrated Chemistry System Amostra: soro e plasma
Interferentes: os triglicéridos diminuem o resultado. A hemólise e a bilirrubina não conjugada poderão interferir na determinação. (34)
Método: ensaio enzimático
O produto da reação, 5-amino- 2-nitrobenzoato, absorve a 405nm e a medida é proporcional à atividade da GGT, utilizando uma técnica de cinética bicromática (405, 600nm). (34)
γ-glutamil-3-carboxi-4-nitranilida + glicilglicina → L- γ-glutamil-glicilglicina + 5-amino-2-nitrobenzoato
Valores de referência: Mulheres 5 – 55 U/L Homens 15 – 85 U/L
38
Bilirrubina direta (conjugada)
A bilirrubina, principal constituinte da bílis, é uma das principais substâncias excretadas pelo fígado. Como a bilirrubina é insolúvel no plasma, esta é transportada para o fígado ligada à albumina (bilirrubina não conjugada), onde vai ser conjugada com o ácido glucorónico tornando-a hidrossolúvel (bilirrubina direta), sendo depois eliminada pela bílis. (9)
A bilirrubina direta testa a capacidade do fígado para a conjugação e excreção de bilirrubina. Este valor aumenta em obstruções hepáticas, cirrose, hepatite e ajuda no diagnóstico de problemas metabólicos e hematológicos. (9,37)
Equipamento: Dimension® Integrated Chemistry System Amostra: soro e plasma
Interferentes: a bilirrubina é fotossensível. A hemólise pode diminuir os resultados. Várias substâncias podem interferir com o resultado, nomeadamente: albumina, ácido ascórbico, colesterol, hemoglobina, lipémia, proteína total e algumas drogas. (37)
Método: ensaio cinético
O cromóforo vermelho absorve a 540nm e é medido utilizando uma técnica bicromática de ponto final (540, 700nm). (37)
Bilirrubina conjugada + Ácido sulfanílico diazotado → Cromóforo vermelho
(absorve a 540nm)
Valores de referência: 0.0 – 0.2 mg/dL
Bilirrubina total
O aumento da concentração de bilirrubina total deve-se quer a um aumento da bilirrubina não conjugada, aumento da bilirrubina conjugada ou de ambas.
As determinações de bilirrubina direta são utilizadas no diagnóstico e tratamento de problemas hepáticos, hemolíticos, hematológicos e metabólicos, incluindo hepatite e doença da vesícula biliar. (38)
A determinação da bilirrubina indireta (não conjugada) é realizada pela diferença entre a bilirrubina total e a bilirrubina direta.
39 Equipamento: Dimension® Integrated Chemistry System
Amostra: soro e plasma
Interferentes: a bilirrubina é fotossensível. Lipémia e algumas drogas podem interferir com o resultado. (38)
Método: ensaio cinético
O cromóforo formado absorve a 540nm e a medição é feita usando a técnica bicromática de ponto final (540, 700nm). (38)
Bilirrubina solubilizada + Acido sulfanílico diazotado → Cromóforo vermelho
(absorve a 540nm)
Valores de referência: 0.2 – 1.0 mg/dL
Valores ≥18 mg/dL em RN são considerados críticos e comunicados ao médico de imediato.
Amónia
Em condições normais, enzimas hepáticas metabolizam a amónia em ureia. Várias doenças provocam um aumento na concentração de amónia (hiperamonémia). (9,39)
As causas mais comuns de hiperamonémia são doença hepática avançada e falha renal. Doença severa do fígado ou doença crónica (como ocorre em hepatites fulminantes e cirrose hepática, respetivamente), leva a uma deficiência do metabolismo da amónia. Síndrome de Reye, uma desordem do sistema nervoso central (SNC) com disfunção hepática associada, origina também hipernamonémia. (9,39)
Equipamento: Dimension® Integrated Chemistry System Amostra: plasma (heparina de lítio ou EDTA)
Interferentes: não utilizar amostras hemolisadas. A bilirrubina não conjugada diminui os resultados. O dextrano e a hemoglobina aumentam os resultados. A lipémia também poderá alterar a determinação. (39)
Método: ensaio enzimático
A oxidação do cofator diminui a absorvância, que é proporcional à concentração de amónia e é monitorizada a 340/700nm. (39)
40
GLDH ɑ-cetoglutarato + NH4+ + cofator reduzido
→ L-glutamato + cofator + H2O
Legenda: glutamato desidrogenase (GLDH); amónia (NH4+); água (H2O)
Valores de referência: 19 – 54 μg/dL
Albumina
A albumina é sintetizada pelo fígado e é a proteína de maior concentração no plasma. É usada como proteína de transporte e de ligação para o cálcio, os ácidos gordos, a bilirrubina, as hormonas, as vitaminas e fármacos. (40)
Esta determinação encontra-se diminuída na doença hepática, resultando de concentrações de imunoglobulinas aumentadas, perda para o espaço extravascular e inibição direta da síntese por toxinas e álcool. O fígado é capaz de sintetizar elevadas quantidades desta proteína até o dano hepático ser severo, com aproximadamente perda de 95% de função. Valores diminuídos podem resultar de doença renal, que deixa escapar a albumina para a urina, má nutrição ou por uma dieta pobre em proteínas. (9,40)
Equipamento: Dimension® Integrated Chemistry System Amostra: soro e plasma
Interferentes: a heparina de lítio reduz o resultado. Tubos de colheita com oxalato de potássio e fluoreto de sódio diminuem os resultados de albumina em 10%.
A lipémia também pode interferir no resultado. (40) Método: ensaio cinético
O método da albumina é uma adaptação do método púrpura de bromocresol. A interferência da lipémia é diminuída através de um branqueamento de múltiplos comprimentos de onda. A quantidade do complexo formado é diretamente proporcional à concentração de albumina e é medida utilizando uma técnica policromática de ponto final (600, 540, 700nm). (40)
41 pH 4.9
Albumina + Corante púrpura de → Complexo Albumina-Corante púrpura bromocresol de bromocresol
(não absorvente a 600 nm) (absorve a 600 nm)
Valores de referência: 3.4 – 5.0 g/dL