N O V A S T É C N I C A S E A P A R E L H A G E N S
CÂMARAS DE SEDIMENTAÇÃO NO ESTUDO OTOLÓGICO
DO LÍQUIDO CEFALORRAQUEANO
A . S P I N A - F R A N Ç A
U m dos principais óbices ao progresso dos estudos sôbrè as células
do-líquido cefalorraqueano ( L C R ) tem sido a distorsão dos detalhes d a
estru-tura celular resultante, em grande parte, dos danos causados pela
centri-fugação, habitualmente empregada p a r a enriquecimento da amostra, dada
a parvicelularidade própria ao L C R tanto em condições normais como em
muitas eventualidades patológicas. Visando garantir melhor preservação
ce-lular têm sido desenvolvidas diversas técnicas baseadas em processos de
sedimentação, de filtração e de f l o c u l a ç ã o
2. Vantagens e desvantagens p o
-dem ser enumeradas em relação a cada u m a dessas técnicas, embora todas
se mostrem superiores às que empregam a centrifugação em qualquer de
suas fases.
A facilidade de execução e os bons resultados que asseguram v ê m
pro-porcionando cada vez maior difusão aos métodos que utilizam a
sedimenta-ção gravitacional, dita acelerada, p a r a cuja padronizasedimenta-ção muito
contribuí-r a m os estudos de S a y k
3. Diversas modificações dessa técnica têm sido
propostas, na maioria mediante introdução de variantes nos suportes de
filtração — como na de Sornas
4e na da K o l a r & Z e m a n
1— e, em
algu-mas, pela associação da sedimentação a outros processos biofísicos, como a
sub-centrifugação
7. Dentre as modalidades de sedimentação gravitacionar
acelerada, Subéro, Foncin e L e B e a u
5chamaram a atenção para as
vanta-gens resultantes daquela introduzida por S u t a
6, em 1966, baseada no
em-prego de câmara especial de sedimentação, por eles designada c â m a r a
de S u t a .
A finalidade desta nota é difundir em nosso meio os principais dados
técnicos que devem ser observados p a r a o emprego deste último método.
D e p a r t a m e n t o d e N e u r o l o g i a , F a c u l d a d e d e M e d i c i n a da U n i v e r s i d a d e de S ã o P a u l o : P r o f e s s o r A s s i s t e n t e .
Agradecimentos — O a u t o r a g r a d e c e a o P r o f . J . L e B e a u a o p o r t u n i d a d e
T É C N I C A
A c â m a r a de s e d i m e n t a ç ã o d e S u t a c o n s t a d e s u p o r t e d e p l á s t i c o t r a n s p a -r e n t e ( f i g . 1 ) , e m cuja p a -r t e s u p e -r i o -r há o -r i f i c i o , no q u a l é -r o s q u e a d o s e g m e n t o rtt c i l i n d r o ô c o , t a m b é m d e p l á s t i c o . E n t r e a base d o s u p o r t e e o c i l i n d r o é c o l o c a d a l â m i n a h i s t o l ó g i c a e, s o b r e esta, d i s c o de p a p e l d e f i l t r o espesso c o m o r i f í -c i o -c i r -c u l a r -c e n t r a l , t e n d o este o r i f í -c i o o m e s m o d i â m e t r o i n t e r n o do -c i l i n d r o .
U m a v e z c o l o c a d a a l â m i n a e o papel d e f i l t r o e m p o s i ç ã o , r o s q u e i a - s e o c i l i n d r o a t é q u e suas b o r d a s p r e n d a m f i r m e m e n t e a b o r d a do o r i f í c i o i n t e r n o d o p a p e l de f i l t r o s o b r e a l â m i n a . A s e g u i r , c o l o c a - s e , p e l a a b e r t u r a s u p e r i o r d o c i l i n d r o , a a m o s t r a de L C R d i r e t a m e n t e s o b r e a l â m i n a . A p ó s a c o l o c a ç ã o d a a m o s t r a é a c o n s e l h á v e l q u e a e x t r e m i d a d e s u p e r i o r do c i l i n d r o seja v e d a d a p a r a e v i t a r q u e p a r t í c u l a s de p o e i r a v e n h a m a p r e j u d i c a r a q u a l i d a d e final da p r e -p a r a ç ã o .
A a m o s t r a d e L C R d e v e ser e s t u d a d a l o g o a p ó s a c o l h e i t a e o v o l u m e a ser c o l o c a d o na c â m a r a v a r i a r á de a c o r d o c o m o n ú m e r o d e c é l u l a s / m m ' . E m g e r a l c e r c a de 1,5 ml são c o l o c a d o s p a r a as a m o s t r a s q u e c o n t e n h a m a t é 100 c é l u l a s / m m3
, r e d u z i n d o - s c p r o g r e s s i v a m e n t e o v o l u m e a t é 0,2 m l p a r a a q u e l a s q u e c o n t e n h a m m a i s d e 5.000 c é l u l a s / m m -1
.
C o m o n o r m a p r á t i c a , o b a l a n c e a m e n t o d o s f a t o r e s q u e i n t e r f e r e m n o m é t o d o d e v e ser t a l q u e , d e n t r o d e 15-20 m i n u t o s , a f a s e l í q u i d a e s t e j a r e m o v i d a q u a s e q u e c o m p l e t a m e n t e , r e s t a n d o s o b r e a l â m i n a a p e n a s d e l g a d a c a m a d a ú m i d a q u e c o n -t é m a s c é l u l a s .
D e s r o s q u e i a - s e e n t ã o o c i l i n d r o e r e t i r a - s e c u i d a d o s a m e n t e a l â m i n a d a c â m a r a , a i n d a c o m o p a p e l d e f i l t r o s o b r e s i . É s t e é r e m o v i d o a s e g u i r e o s e d i m e n t o o b t i d o n o l o c a l d a l â m i n a c o r r e s p o n d e n t e a o o r i f í c i o d o p a p e l d e f i l t r o é s u b m e -t i d o a o s p r o c e s s o s d e f i x a ç ã o e d e c o l o r a ç ã o d e s e j a d o s . P a r a os e x a m e s d e r o -t i n a , as t é c n i c a s c l á s s i c a s d e M a y G r ü n w a l d - G i e m s a e d e L e i s h m a n s ã o s a t i s f a t ó r i a s .
E m nosso m e i o , c o n s i d e r a n d o a s t e m p e r a t u r a s h a b i t u a l m e n t e e l e v a d a s , é c o n v e -n i e -n t e p r o c e s s a r a s e d i m e -n t a ç ã o e m a m b i e -n t e r e f r i g e r a d o ( + 4 ° C ) .
R E S U M O
N o t a p r á t i c a s o b r e o e m p r e g o de c â m a r a de s e d i m e n t a ç ã o d e S u t a no p r e p a r o das a m o s t r a s p a r a e s t u d o da c i t o l o g i a do l í q u i d o c e f a l o r r a q u e a n o .
S U M M A R Y
Sedimentation chambers for the study of cerebrospinal fluid cytology
T e c h n i c a l r e p o r t on t h e use o f S u t a ' s s e d i m e n t a t i o n c h a m b e r f o r p r e
-p a r i n g c e r e b r o s -p i n a l f l u i d sam-ples f o r c y t o l o g i c a l s t u d i e s . S o m e a d v a n t a g e s of t h e m e t h o d a r e discussed, as w e l l as d a t a f o r its a p p l i c a t i o n .
R E F E R Ê N C I A S
1 . K O L A R , O . & Z E M A N , W . — S p i n a l f l u i d c y t o m o r p h o l o g y . A . M . A . A r c h . N e u r o l . 18:44, 1968.
2 . R I C H , J . R . — A s u r v e y o f c e r e b r o s p i n a l f l u i d c y t o l o g y . B u l l . L o s A n g e l e s N e u r o l . S o c . 34:115, 1 9 6 9 .
3 . S A Y K , J . — C y t o l o g i c D e r C e r e b r o s p i n a l f l u s s i g k e i t . V e b G u s t a v V e r l a g , Jena, 1960, p p . 8 - 1 2 .
4 . S O R N A S , R . — A n e w m e t h o d f o r t h e c y t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f t h e c e r e -b r o s p i n a l f l u i d . J . N e u r o l . N e u r o s u r g . P s y c h i a t . 30:568, 1967.
5 . S U B É R O , A . ; F O N C I N , J . F . & L E B E A U , J . — D i a g n o s t i c c y t o l o g i q u e d u l i q u i d e c e p h a l o r a c h i d i e n p a r l a c h a m b r e d e s e d i m e n t a t i o n d e S u t a . N e u r o -C h i r u r g . ( P a r i s ) 14:627, 1968.
6 . S U T A , M . — A s i m p l e a p p a r a t u s f o r q u a l i t a t i v e c y t o l o g i c a l e x a m i n a t i o n o f t h e c e r e b r o s p i n a l f l u i d ( r e s u m o ) . C s . N e u r o l . 29:101, 1966.
7 . S U T A , M . — C o n t r i b u t o a l l a m e t o d i c a d e l l a c i t o l o g i a q u a l i t a t i v a d e l l i q u i d o c e r e b r o s p i n a l e e d e g l i e s s u d a t i . L a v o r o n e u r o p s i q u i a t . 42:851, 1 9 6 8 .
